SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 主要内容 •实验目的•实验原理•实验材料和试剂•实验步骤•结果处理 实验目的 系统中所有组分都含有0.丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺染色1～2小时或过夜。用5～15%的丙烯酰胺所灌制凝胶的线性分离范围如下表：Tris-甘氨酸电泳缓冲液 •了解电泳...
电泳结束后,每块凝胶加入100ml去离子水,微波加热30s,水平摇床震荡漂洗5分钟,重复三次。 (此步为关键步骤,会极大的影响染色效果和灵敏度) 每块凝胶加25ml染色液,微波加热15s,水平摇床震荡。 蛋白条带会在10分钟开始逐渐显现,在1小时内达到90%染色效果。 脱色步骤一般没有必要,但可进一步降低背景。加入100ml自来水,...
染色（20min）脱色（30min~2h）分析 SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 实验过程 1.装配装置 BG-verMINI型迷你垂直电泳槽(北京百晶)SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 实验过程 2.凝胶配制 *Acr有神经毒性 下胶(分离胶)10%上胶(浓缩胶)5% H2O30%Acr-Bis 3.9ml3.3ml 3.4ml0.83ml Buffer(含SDS)10%APS TEMED (1.5MTris-ClpH8...
SDSPAGE染色一般要3min。 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是在聚丙烯酰胺凝胶电泳中引用了SDS,是最常用的一种蛋白表达分析技术根据检体中蛋白质分子量大小的不同,使其在电泳胶中分离。 SDS-PAGE实验步骤: 1、组装胶板时检查封闭是否完全。否则跑出来的胶形状可能千奇百怪甚至无法电泳。 2、灌胶操作时...
SDS-PAGE电泳条带不是笑就是皱眉,什么原因造成的? 实验老司机 1.2万 0 基础试验操作篇——PCR实验 AtaGenix-普健生物 4.6万 46 SDS-PAGE凝胶电泳操作 博奥龙龙宝博士 4630 0 SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)蛋白电泳-染色、脱色前准备工作 武汉菲恩生物 1126 0 ...
6.1×SDS-PAGE电泳缓冲液:25mM Tris(3.0285g/L),192mM甘氨酸(14.41g/L),0.1%SDS(1g/L),pH 8.30; 7.染色液:0.25g考马斯亮蓝R-250溶解于45ml甲醇,45ml水,10ml冰醋酸,过滤除去杂质; 8.脱色液:45ml甲醇,45ml水,10ml冰醋酸; 9.固定液:50ml甲醇,40ml水,10ml冰醋酸; 10.2×SDS-PAGE上样缓冲液:10% SDS ...
7.加样电泳（每孔加样15μl）。8.卸下玻板，剥离凝胶放在器皿内，切去一角作为方位标记。9.染色：用至少五倍体积染色液浸泡凝胶，于平缓摇摆平台上室温1h左右。10.脱色：用蒸馏水漂洗数次，再用脱色液脱色，至蛋白质条带清晰 注意事项 （1）聚丙烯酰胺具有神经毒性，操作时要戴手套。（2）安装电泳槽时要注意...
通常凝胶制备需要1～1.5小时,电泳在25～30mA下通常需要3小时,染色2～3小时,过夜脱色。通常使用的垂直平板电泳可以同时进行多个样品的电泳。Ornstein和Davis设计的高pH碱性不连续系统,有其独特的特点。根据Henderson-Hasselbalch公式:pH=pKa + lg([Base]/[Acid])...
SDS-PAGE,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是一种可以根据蛋白质的分子量分离样本中蛋白质的技术。 2. 原理 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(APS),N,N,N',N’-四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支...