1) 将电极导线接至电源,黑的接于负极,红的接于正极 pH8.3 时,与 SDS 结合的蛋白质荷负电,它们将向正极迁移。 2) 压缩胶部分每块胶以 8mA 电流(恒流) 电泳。若两块胶在一个电泳槽内同时进行电泳,则以 16mA 电流进行电泳。在压缩胶/分离胶界面处,蛋白质样品将压缩...
1) 将电极导线接至电源,黑的接于负极,红的接于正极 pH8.3 时,与 SDS 结合的蛋白质荷负电,它们将向正极迁移。 2) 压缩胶部分每块胶以 8mA 电流(恒流) 电泳。若两块胶在一个电泳槽内同时进行电泳,则以 16mA 电流进行电泳。在压缩胶/分离胶界面处,蛋白质样品将压缩成一窄带。 3) 当溴酚蓝进入分离胶时...
恒流还是恒压取决于你的缓冲系统以及胶的孔径大小 通常,恒流能够获得更好的对比度,应为产热比较均匀,但电流不可太大,带高会导致条带的弥散,但是相对恒压而言耗时可能要常一些 mercedes (2013-10-27 11:55:17) 谢谢各位。我做的是双向电泳,不知道第二向的SDS-PAGE应该用什么条件好呢? sunshine039 (2013-10-...
SDS-PAGE电泳,恒压恒流均可,看个人喜好和经验而定,反正是电压越大,蛋白质迁移速率越大。 周围的同学还是用恒压的多一些。一般浓缩胶电压要一些,60-100V,分离胶120-200V。每种电压的持续时间可通过观察溴酚兰的前沿决定。还有人一种电压跑下来的也可以。 00分享举报您可能感兴趣的内容广告 健康营养师_及报考流...
2.4 电泳 内槽加入负极电泳缓冲液,外槽加入正极电泳缓冲液,形成 Trcine-SDS-PAGE 电泳系统,用20mA恒流电泳 3h。考马斯亮兰染色后,用甘油溶液孵育,并用凝胶成像仪成像。 3 实验结果 3 种分离胶用于分离低分子量蛋白质标准品和特低分子量蛋白质标准品的电泳结果见图1.其中图1A为由"6C+U'致密胶和夹层胶组成的...
SDS-PAGE全细胞蛋白电泳电泳前将2125中样品取出溶化后在95c下加热10min放在冰上冷却后即可点样第一个孔点buffer第二点marker其余每孔点样7屮电泳时恒流30ma视其指示剂溴酚兰到达胶的底端为止 2.2.5 提取蛋白质:用Ependorf管离心收集菌体(对数生长期),称其重量,并用样品缓冲液(sample buffer)裂解细胞,使其...
恒压或恒流电源、垂直板电泳槽和制胶模具。2.试剂 （1）水。（2）分离胶缓冲液（4×，A液） 1.5moL/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷18.15g，加适量水溶解，用盐酸调节pH值至8.8，加水稀释至100mL。（3）30%丙烯酰胺溶液（B液） 称取丙烯酰胺58.0g、N,N-亚甲基双丙烯酰胺2.0g...
4.点样和电泳:点样量10~20μL,8~20mA恒流,直至溴酚蓝标记离开分离胶。 5.染色:凝胶经0.04%考马斯亮蓝R-250、12%三氯乙酸染色1~2天后,用自来水脱色。 A-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 1.贮液参考SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳,其中: 配胶用APAGE电极缓冲液:冰乙酸0.854mL+甘氨酸0.0854克+水——1000mL。 APAGE电...
2010药典-SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(药典附录22) 大多数蛋白质与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物,使蛋白质分子所带电荷的负电荷远远超过天然蛋白质的净电荷,消除了不同蛋白质分子的电荷效应,使蛋白质按分子大小分离。 仪器:恒压或恒流电源,垂直板或圆盘电泳槽和...
细胞因子电泳纯度(非还原型SDS-PAGE)测定标准操作规程 依据:《中华人民共和国药典》2005年版第三部。 范围:适用于细胞因子纯度的检测。 目的:检测细胞因子蛋白质纯度。 原理:蛋白质具有不同的电荷和分子量,在经过阴离子去污剂SDS处理后,蛋白质分子上的电荷被中和,在聚丙稀酰胺凝胶电泳时,不同的蛋白质按照其分子量...