由于胶孔径小,而且成为一个整体的筛状结构,它们对大分子阻力大,小分子阻力小,起着分子筛效应,也就是蛋白质在分离胶中,以分子筛效应和电荷效应而出现迁移率的差异,最终达到彼此分开。 PAGE 胶的聚合原理:甲叉双丙烯酰胺和丙烯酰胺在过硫酸胺的作用下聚合,形成胶,如下图: 注:催化剂:过硫酸铵(AP)在隔氧的状态...
首先得说一下导电性与溶液中粒子的总电荷数和浓度有关，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9，电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统，在PH6.7下，HCL的主要离子是CL-，而H+微乎其微。在电场下离子会移动，导致电荷分布不均匀，由于CL-浓度大，所以在电场中移动得快，而甘氨酸由于主要呈现两性离子（也就...
以此凝胶为支持物的电泳称聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。 PAGE根据其有无浓缩效应,分为连续系统和不连续系统两大类。前者电泳体系中缓冲液pH及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场中的泳动主要靠电荷和分子筛效应;后者电泳体系中缓冲液离子成分、、凝胶浓度及电位梯度是不连续的,带电颗粒在电场中的泳动不仅主要靠电荷和分子筛...
由于胶孔径小,而且成为一个整体的筛状结构,它们对大分子阻力大,小分子阻力小,起着分子筛效应,也就是蛋白质在分离胶中,以分子筛效应和电荷效应而出现迁移率的差异,最终达到彼此分开。 PAGE 胶的聚合原理:甲叉双丙烯酰胺和丙烯酰胺在过硫酸胺的作用下聚合,形成胶,如下图: 注:催...
由于胶孔径小,而且成为一个整体的筛状结构,它们对大分子阻力大,小分子阻力小,起着分子筛效应,也就是蛋白质在分离胶中,以分子筛效应和电荷效应而出现迁移率的差异,最终达到彼此分开。 PAGE 胶的聚合原理:甲叉双丙烯酰胺和丙烯酰胺在过硫酸胺的作用下聚合,形成胶,如下图:...
SDSPAGE精心总结 SDSPAGE精心总结 2、TEMED 3、浓缩效应 Pr- Pr- Pr- Cl- Cl-Gly-Cl- Cl- Cl- Cl-Gly-Gly- GlyCl-Gly-Cl-Gly- Gly- Cl- 主要离子 氯离子甘氨酸离子(pI5.97)蛋白质离子 如果要利用凝胶电泳测定某一蛋白质的分子量就必须将电荷效应去掉或减少到可以忽略不计的程度，使蛋白质泳动率的...
SDS-PAGE-精心总结 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）2015年3月13日 一.实验原理 1、带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动，这种现象称为电泳。2、TEMED 3、浓缩效应 主要离子 PrCl- PrClGlyGlyCl-GlyCl- ClGly- PrClGly- 氯离子甘氨酸离子(pI5.97)蛋白质离子 PH6.8 Cl- Gly- Cl- GlyCl- PH8....
(3)分子筛效应 凝胶具有网络结构,蛋白质物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大。此外由于SDS和巯基乙醇的作用,蛋白质成为带负电的线形分子,因此在SDS-PAGE凝胶电泳中,取决于蛋白质分子大小,这就大大提高了分辨能力。分子量大的蛋白涌动较慢,分子量小的蛋白质涌动较快。
与常规PAGE类似,不连续SDS-PAGE对蛋白质的分离除了基于分子筛效应外,还基于其对样品的浓缩效应。 3.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验方法 样品缓冲液中须含有3～4倍于蛋白质的SDS以及足够断裂二硫键的β-巯基乙醇或二硫苏糖醇,而且蛋白须完全变性展开。由于每克伸展的蛋白质结合1.4g单体SDS,因此通常在样品缓冲液中加1%...
SDS-PAGE实验报告 一、实验目的: 1.1理解SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量的基本原理。 1.2掌握分子电泳的基本步骤,掌握计算蛋白质相对分子质量的方法。 二、实验内容和原理: 2.1电泳(electrophoresis):是指带电颗粒在电场中向着与它电性相反的电极移动的现象。许多重要的生物分子都含有可电离基团(如氨基酸、多肽、蛋白...