将一套玻璃板插于塑料夹中,置于洁净桌面上,平的一面朝下,确保两块玻璃板底部平齐后夹紧,固定于制胶架上,玻璃板底部置于橡胶垫上。 制胶步骤 🧬 按照配方先制备下层分离胶,用水或乙醇压平,等下层凝固后制备上层胶,插入合适尺寸的梳子即可。 通过以上步骤,你就能成功制备SDS-PAGE凝胶,为蛋白质分离打下坚实基础...
按照配方表依次加入相应体积的试剂(1.0mm玻璃板一块胶总体积5.0ml,1.5mm玻璃板一块胶总体积7.5ml足矣),加完SDS后加APS前可以先混匀,然后迅速加入APS和TEMED,马上混匀(手摇或者振荡器摇匀),灌胶,注意胶的高度,要留有足够的空间给压缩胶,一般压缩胶的深度要求是梳子下缘再往下1厘米左右。然后用95%酒精压胶,注意...
清洗玻璃板:制胶的第一步就是要确保玻璃板干净无胶粒残留,尤其是厚玻璃板的凹槽部分。 检漏:静置20分钟左右,观察液面下降高度。如果下降过快,说明漏液严重,需要重新固定玻璃板,确保玻璃板下端对齐。 固定玻璃板:使用大夹子夹好胶架上方,防止玻璃板掉落导致破碎。 清洗配胶工具:配胶用的50mL离心管要彻底洗净,放入...
3、组装玻璃板：准备制胶架，确保橡胶垫完好。选取玻璃板（厚薄），确认厚度。将玻璃板插入塑料夹中，平面向下，确保底部平齐后夹紧，置于制胶架，底部置于橡胶垫上。4、制备分离胶：根据玻璃板厚度，加入相应试剂，加入SDS后迅速加入APS和TEMED，混匀后灌胶，留出空间给压缩胶，用酒精压胶。5、制备压...
一、SDS-PAGE 凝胶制备 1、玻璃板梳子的清洁 先用自来水浸泡5分钟,洗洁精清洗,注意厚玻璃板两侧沟槽容易残留胶,可以用尖锐的东西轻刮,然后用自来水冲洗干净泡沫,再用纯水冲洗即可,37度烘干或者吹风筒吹干,注意别用热风长时间近距离吹,厚玻璃板两侧的边条是用粘胶粘在一起的,高热会使粘胶融化,久而久之可能引起密闭...
SDS-PAGE压胶问题 同志们,我13年研究生毕业后工作了一年,现在到了一个生物公司,这个公司在配制SDS-PAGE的分离胶时,一直用水压胶,以前效果一直不错,但同时配多块胶的时候就很容易出现两块以上的胶压不平的现象。经常做实验的都知道,无水乙醇是很好的压胶试剂,所以有一天我在配制多块胶时,就每块板用了200...
10%PAGE胶凝固剂(μL)50100150200250300400500 PAGE胶促凝剂(μL)48121620243240 3.浓缩胶的配制 (1)根据浓缩胶配方表制好浓缩胶胶液。 (2)待下层胶凝固以后,倒干净下层胶上面压胶液(若使用异丙醇压胶,请在清理干净后,再用蒸馏水清洗2-3次,以完全去除异丙醇),然后倒入制备好的SDS-PAGE上层胶预混液,倒满后...
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统,与连续缓冲系统相比有较高的分辨率。先把较稀的样品加在浓缩胶(作用是堆积,凝胶浓度较小,孔径较大)上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸时,电泳开始后,HCl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离...
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统,与连续缓冲系统相比有较高的分辨率。先把较稀的样品加在浓缩胶(作用是堆积,凝胶浓度较小,孔径较大)上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸时,电泳开始后,HCl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离...
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统,与连续缓冲系统相比有较高的分辨率。先把较稀的样品加在浓缩胶(作用是堆积,凝胶浓度较小,孔径较大)上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸时,电泳开始后,HCl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离...