说到WB制胶,相信很多同志都有说不尽的"翻车"故事。俗话说的好,工欲善其事必先利其器,SDS PAGE凝胶就是我们做WB要利的器,因为高质量的胶是跑出漂亮条带的重要前提之一。 2.1SDS PAGE 凝胶制备 2.1.1玻璃板梳子的清洁 先用自来水浸泡5分钟,洗洁精清洗,注意厚玻璃板两侧沟槽容易残留胶,可以用尖锐的东西轻刮,...
SDS-PAGE 蛋白质样品的制备 将收集的各样品加入等体积的 2×SDS-PAGE Loading Buffer,煮沸裂解 5min,冰浴 2min,12,000rpm 离心 10min,取上清-20℃保存备用。 SDS-PAGE 蛋白质电泳(参照分子克隆实验指南操作)(萨姆布鲁克,2002) 1)按照电泳装置的使用说明,装好洁净干燥的玻璃板。 2)分离胶的制备 按下列成分配...
理想情况下,纯蛋白在 SDS PAGE 凝胶上应呈现单一的条带。若出现多条条带,则表明蛋白样品存在杂质或降解产物。一般认为,在考马斯亮蓝染色的凝胶上,若目标蛋白条带以外的杂蛋白条带强度低于目标蛋白条带强度的 5%,可初步认为蛋白纯度较高。 2. 条带宽度与形状: 纯蛋白条带应具有较窄且均一的宽度,边缘整齐。如...
1,2,3,4,5,6,,10号抗原是包涵体,分别用2 mol/L,4 mol/L,尿素各洗一次,一般溶解后4度在摇床上摇20min在离心1500g 30min收集沉淀,洗掉少许杂蛋白,收集相应的沉淀,最后用8M尿素溶解然后留上清,用SDS—PAGE鉴定分子量及纯度。8,14号抗原不是包涵体,超声离心后直接收上清,用盐酸胍裂解液溶解后直接SDS—PAGE...
在SDS-PAGE中使用的凝胶是聚丙烯酰胺(polyacrylamide),使蛋白质呈线性化的试剂是SDS。因此得名SDS-PAGE。 一 SDS-PAGE的原理首先准备一套蛋白电泳设备,蛋白质样品和marker上样到凝胶孔中,设置电压,启动电泳程序。通常样本中会添加一种还原剂,如巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)(在洗涤剂的存在下,如SDS),可以打开折叠...
幸运的是,使用 SDS-PAGE 样品制备试剂盒可以在数分钟内去除样品中含有的各种干扰化学品(如离液剂、洗涤剂、脂质、极端 pH 和盐类)。相关产品Pierce™ SDS-PAGE 样品制备试剂盒 仅供科研使用。不可用于诊断程序。 规格 缓冲液上样缓冲液 凝胶类型SDS-PAGE 产品类型SDS-PAGE 样品制备试剂盒 凝胶兼容性SDS-PAGE ...
2器材: 旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,1.5ml 微量离心管,双面微量离心管架,干式恒温气浴(或恒温水浴锅),制冰机,恒温摇床,培养皿(已铺好固体LB-Amp),超净工作台,酒精灯,玻璃涂棒,恒温培养箱。 3材料和试剂: 质粒DNA,重组DNA,培养基(不加抗菌素),LB培养基(加抗菌素),无菌ddH2O,IPTG,X-gal。
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SDS-PAGE的制备 科欣雨飘SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE ）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一、 材料准备 1M Tris-HCl, pH8.8、10% SDS 、Ammonnium persulfate (过硫酸铵)和1M Tris-HCl, pH6.8室温保存。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED 4℃避光保存。过硫酸铵配制成10%溶液后，...