下面我们将介绍SDS-PAGE电泳试剂的配制方法。 聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制 1. 将蒸馏水取2L,通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质,备用。 2. 将40%(w/v)丙烯酰胺10mL,在干燥器中烘干2小时,然后加入蒸馏水固定容积至50mL。将10%(w/v)N, N’-二甲基亚硫脲5mL加入均聚化溶液中,搅拌30分钟至完全溶解。 3. ...
-这是制备聚丙烯酰胺凝胶的基础溶液。 2. 响应稀释液(Response diluent) -用于稀释聚丙烯酰胺溶液以获得不同浓度的凝胶。 -可通过将聚丙烯酰胺溶液与水按1:3体积比混合来制备响应稀释液。 二、缓冲液配方: 1. 离子化追踪剂(Tris-Glycine running buffer) -用于凝胶电泳盒中电解质的运行。 -配方为: 3g Tris bas...
SDS-PAGE电泳相关溶液的配置5将凝胶小心取下放入容器中加入染色液用摇床摇23h6待条带清晰后倒出染色液加入脱色液过夜7将脱色液倒掉在灯箱下观察8用数码相机拍照分析 电泳相关溶液的配置: 1、30%丙稀酰胺混合溶液(100ml):称取29g丙稀酰胺和1gbis丙稀酰胺,用水溶解定容到100ml,过滤,4摄氏度保存一个月。 2、5×...
SDS凝胶电泳常用试剂配制方法如下: 一、3×SDS-PAGE loading buffer的配制 3×SDS-PAGE loading buffer 10ml 1M Tris-Hcl (PH 6.8) 1.5ml SDS 0.6g BPB(溴酚蓝) 30mg 甘油(丙三醇) 3ml 去离子水 5.5ml 1、将除BPB以外的药品溶解。SDS常温下很难溶解,可以在37℃水浴溶解。溶解后,再加入BPB,进行溶解; 2...
SDS-PAGE凝胶电泳:将凝胶玻璃板固定于电极架,放入电泳槽中的固定架(小玻璃板朝内,卡紧;若只跑一块胶,槽的另一边垫一块塑料板);在上下槽内加入1×电泳缓冲液(上槽内的电泳液应没过小玻璃板上缘3-5mm;下槽内的电泳液应没过金属丝,水位低于大玻璃板上缘3-5mm,内液高于外液,排除凝胶底部两块玻璃...
今天去听了导师给研究生带的高级生物化学实验课,学习了SDS-PAGE电泳的一整套操作,简单总结一下。 制板 检漏 制胶 (1) 制备10%的分离胶(梳子插进去 往下1cm,划线) (2)加1ml蒸馏水(液面压平,排气泡) (3) 制备5%的浓缩胶 样品处理 点样 电泳
实验用品(溶液配制说明详见文章下方)蛋白样品,SDS-PAGE loading buffer,PBS,Tris-Hcl (PH 8.8), Tris-Hcl (PH 6.8) ,30%丙烯酰胺,10%SDS,10%过硫酸,5×SDS-PAGE电泳缓冲液,考马斯亮蓝R-250染色液,脱色液。实验步骤一、凝胶配置1.分离胶的配制(1)找出配套的胶板,用擦镜纸擦干净,并固定...
以下是制作SDS-PAGE凝胶的基本配方和制胶步骤: 配方: 1. 1%丙烯酰胺(Acrylamide)溶液:将3.7g丙烯酰胺和60μl N,N'-亚甲基双丙烯酰胺溶解在0.5ml双蒸水中,搅拌均匀。 2. 2.5%BT(Bis-Tris)溶液:将0.1g BT和0.25ml TBE(三酸乙酸盐电泳缓冲液)混合均匀。 3. 10%过硫酸铵(AMS)溶液:将10μl AMS溶解在1...
SDS-PAGE凝胶电泳操作蛋白含量较低的酶制剂或原料样品1粉剂或颗粒样品称取样品1g加入35ml蒸馏水进行搅拌溶解1h搅拌时间可根据实际情况进行增减4000rpm离心10min取离心上清液等体积加入20的三氯乙酸聚沉30min离心弃去离心上清液用70的丙酮溶液洗涤沉淀4000rpm离心10min重复洗涤35次将丙酮洗涤液吹干加入适量13mlpbs溶解沉淀...