🔍 配制SDS-PAGE凝胶时,务必关注以下几点:1️⃣ 试剂有效期与清澈度:定期检查配胶试剂,一旦发现沉淀或结晶,请立即更换。2️⃣ pH选择与浓度:根据实验需求,谨慎选择pH8.8或pH6.8的Tris-HCl,并注意1.0M与1.5M的浓度差异。3️⃣ 储存与保护:4℃下保存的10%SDS易结晶,需小心使用。30%丙烯酰胺应避光且...
综上所述,研究者在选择PAGE凝胶产品时,除了要针对目的蛋白条带大小选择正确浓度的PAGE胶以外,还需仔细辨别各个品牌的产品性能,并且需要明确自己对目的蛋白条带的电泳效果预期。上述产品中,品牌E对一般蛋白的分离效果其实也非常不错,但如果需尽量呈现蛋白条带的多样性或者需检测分子量较小的目的蛋白,则需要选择像Starvi...
SDS-PAGE凝胶电泳法是测定蛋白质分子量最常用最简单的方法,其实验结果也容易受到多方面的影响,因此操作时也需要注意以下注意事项: 1.样品制备: 确保蛋白质完全变性:在样品中加入适量的SDS和减少剂(如β-mercaptoethanol或DTT)并在推荐的温度下加热一定时间,以确保蛋白质完全展开并断裂二硫键。
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围如下表 蛋白质分子量范围(KD) 适宜的凝胶浓度(%) >100 8 30-100 10 10-30 12 <10 15 将检漏的蒸馏水倒出,按下表进行SDS-PAGE分离胶的配制(使用凝胶试剂盒) 电泳凝胶浓度 试剂 8% 10% 12% 15% H2O(ml) 4.63 4.0...
凝胶浓度 由于凝胶浓度决定凝胶孔径大小,而凝胶孔径影响电泳效果 (即凝胶的分子筛效应)。特别是对于SDS-PAGE,由于电泳分离只取决于SDS-蛋白质亚基胶束的大小,因此凝胶浓度的选择尤为重要。应根据样品中蛋白质的分子量范围选择合适的凝胶浓度
因此,在进行蛋白SDS-PAGE检测之前,需要预估目标蛋白的分子量大小,然后通过SDS-PAGE实验进行验证。若无法预知目标蛋白分子量大小,则可优先选择蛋白分子量检测范围大的丙烯酰胺浓度开展SDS-PAGE实验,然后将电泳后的凝胶蛋白条带采用凝胶呈像系统软件计算蛋白分子量和纯度。百泰派克生物科技提供基于SDS-PAGE的蛋白分离服务...
聚丙烯酰胺凝胶浓度/% 蛋白质分离范围/kd5 36—2007.5 24—20010 14—20012.5 14—10015 14—60浓缩胶浓度低;分离胶浓度高于浓缩胶,一般不小于5%。8KD的蛋白质可能就要用Tricine–SDS-PAGE系统,因为浓缩胶和分离胶浓度太大,电泳速度很忙,很可能引起电泳带弥散。 00分享举报...
因此,通过PAGE凝胶电泳,可以实现对不同蛋白质大小的分离。需要注意的是,当处理较大的蛋白质复合物或聚合物时,PAGE凝胶电泳的效果可能受到限制。在这种情况下,可以考虑使用其他分离技术,如凝胶过滤、凝胶渗透色谱等。不同分子量大小的蛋白质需要用不同浓度的SDS-PAGE凝胶进行电泳分离。 Western blot中转膜是一种将PAGE...