SDS-PAGE即十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，是一种间断的电泳系统，通常用于分离分子量在5—250kDa之间的蛋白质。十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate ，SDS）和聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel ，PAG）组合使用可以消除结构和电荷的影响，从而仅根据分子量的差异来分离蛋白质。SDS-PAGE的特性：在一定浓度时，...
SDS-PAGE是十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术,用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成。其中四甲基乙二胺(TEMED)作为加速剂能催化过硫酸铵产生自由基。过硫酸铵(APS)作为催化剂产生自由基,从而引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲...
其原理基于蛋白质的电荷密度和分子质量。 1. SDS(十二烷基硫酸钠):在SDS-PAGE中,SDS被用作溶胀剂。SDS能够与蛋白质中的氢键和疏水作用相互作用,使蛋白质的二级、三级结构被破坏并线性展开。SDS与蛋白质发生作用后,每个蛋白质分子上的SDS数量差不多是相同的,即每个氨基酸上有约2.7个SDS分子。 2.聚丙烯酰胺凝胶:...
一、SDS-PAGE凝胶电泳原理 SDS-PAGE凝胶电泳是将蛋白样品加入样品处理液(SDS和巯基乙醇)中,并进行高温加热处理,使蛋白变性,多肽链内部和肽链之间的二硫键打开,使肽链呈现开放状态。打开的肽链通过疏水作用与SDS结合,带有负电荷,在电场的作用下向正极迁移。由于不同大小的肽链在迁移过程中受到的阻力不同,它们逐渐分离。
PAGE胶主要分成两个作用,一个是分离胶的作用,另一个是浓缩胶的作用。 浓缩胶的作用:样品和浓缩胶中的氯离子形成的界面泳动,成为先导界面,甘氨酸分子组成的尾随界面。在移动界面的两个边界之间,是一个电导较低,而电位梯度较陡的区域,他可以推动样品的蛋白质前移之分离胶的前沿。
而SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。其中SDS（十二烷基硫酸钠）是阴离子表面活性剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，从而破坏蛋白分子间的二、三级结构。而强还原剂如β-巯基乙醇，二硫苏糖醇（DTT）均能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶...
TEMED是丙烯酰胺聚合形成的高分子,其作用是聚合反应是自由基聚合,需要有引发剂产生自由基将反应引发过硫酸铵就是引发剂,而TEMED可以催化过硫酸铵产生自由基,从而加速丙烯酰胺凝胶的聚合。TEMED具有浓烈的刺激性气味,使用时注意防护。 过硫酸铵APS 过硫酸铵在水溶液中能水...
以下将详细介绍SDS-凝胶电泳的原理。 一、样品处理: 在进行SDS-凝胶电泳之前,需要对样品进行处理,包括蛋白质的变性和还原。这样做的目的是将蛋白质分子展开成线性构象,使各种蛋白质以相似的形式进入凝胶,并消除了蛋白质修饰对迁移速率的影响。 1.变性:加入SDS变性缓冲液。SDS是一种带负电荷的表面活性剂,可以与蛋白...