第一代逆向标记系统(RV-ΔG) RV的囊膜糖蛋白(glycoprotein,G)是其逆行跨突触所必需的蛋白,G蛋白缺失的RV(RV-ΔG)会丧失跨突触能力,但其复制及转录不受影响(可持续高丰度表达外源基因),因此,RV-ΔG携带报告基因后,可逆向高亮度标记神经元精细形态。 第二代逆向标记系统(RV-N2C(G)-ΔG) CVS-N2c病毒株具...
答:为保证RV-EnvA-△G-DsRed注射时已有高丰度表达的TVA介导其感染神经元及G蛋白补偿其跨突触能力,AAV注射后需表达两周或三周,然后在同一区域注射RV-EnvA-△G-dsRed;RV注射后一般以10天为标准时间牺牲动物,而此时间也可控制在7-12天(所有实验样本都需保证采用一致的时间窗口)。 ◎ AAV helper使用比例? 答...
作为对cPARTS系统范式的验证，Cre依赖的TVA经AAV-PHP.eB递送至VGAT-Cre转基因鼠的全脑，VTA脑区注射RV-EnvA-ΔG-DsRed后，标记到了上游脑区的GABA能神经元，包括外侧苍白球（GPe）、下丘脑外侧区（LHA）、未定带（ZI）、脑桥网状核（PRNr）、外嗅被盖核（LDTg）及前庭核（VNC）等。使用 cPARTS 方法追踪...
结合Cre转基因鼠和Cre-LoxP控制表达TVA及G蛋白的AAV辅助病毒，可以实现只在特定区域特异类型神经元中表达TVA及G蛋白，从而利用RV-EnvA-△G实现对特异类型神经元的逆向跨单突触标记。在应用案例中，RV-EnvA-EGFP和RV-N2C(G)-DG-XFP标记技术分别展示了其在标记不同脑区神经元上的高效性和特异性。这...
CVS-N2c病毒株具有更低的神经毒性以及更强的跨突触突触传递能力,其G蛋白缺失的RV [RV-N2c(G)-ΔG] 能在更低的滴度达到与第一代RV-ΔG相同甚至更好的逆向标记效果,且神经毒性更低。 逆向跨单突触系统(RV-EnvA-ΔG) 利用重组的禽类肉瘤病毒(Aviansarcoma-leukosisvirus,ASLV)的外膜蛋白(EnvA)融合蛋白包装...
第一代逆向标记系统（RV-ΔG）利用RV的囊膜糖蛋白（G蛋白）是其逆行跨突触所必需的蛋白，G蛋白缺失的RV（RV-ΔG）会丧失跨突触能力，但其复制及转录不受影响（可持续高丰度表达外源基因），因此，RV-ΔG携带报告基因后，可逆向高亮度标记神经元精细形态。第二代逆向标记系统（RV-N2C(G)-ΔG）CV...
第二代逆向跨单突触系统采用CVS-N2c毒株，利用Cre转基因鼠结合Cre-LoxP控制表达TVA及G蛋白的AAV辅助病毒...
研究人员为确定驱动AHNVgat+神经元活动及回避行为(引发焦虑场景中)的突触输入,利用狂犬病毒追踪策略,将表达TVA-GFP、RVG的AAVs混合物注射到Vgat-IRES-Cre雄性小鼠AHN中,三周后,同一位点注射RV-EnvA-△G-dsRed,结果显示,AHN中有很多GFP+/dsRed+“起始”细胞,逆行标记dsRed+细胞在上游脑区vSub观察到。
基于cPARTS系统局部注射标记S1脑区内投射到CPu的投射性神经元群 进一步地,作为对PARTS系统范式的验证,通过尾静脉给药将AAV-PHP.eB-TVA递送至全脑,VTA脑区注射RV-EnvA-ΔG-DsRed,VTA的多个上游脑区均可见DsRed报告蛋白表达,包括大脑皮层(CTX)、外侧缰核(LHb)、下丘脑外侧区(LHA)、未定带(ZI)、中脑网状核(MR...