其原理主要包括三个方面:逆转录、PCR扩增和实时荧光定量检测。 1. 逆转录 rt-qpcr实验首先需要将RNA转录为cDNA,这是通过逆转录酶(Reverse Transcriptase)催化的反应来实现的。逆转录酶可以将RNA模板转录成相应的cDNA,为后续的PCR扩增提供模板。 2. PCR扩增 在cDNA合成完成后,接下来是PCR扩增反应。PCR扩增需要引物(...
仪的原理和操作方法,注意事项 21:27 【实验】激光扫描共聚焦显微镜的原理及操作方法、注意事项 13:46 【实验】流式细胞技术的原理及操作方法、注意事项 22:37 【实验】细胞破碎方法,超声破碎仪,高压均质机的原理,使用方法,注意事项,破碎率的测定 26:00 【实验】普通PCR、荧光定量RT-qPCR、数字PCR的基本原理和...
师姐详解从PCR到qPCR实验流程(详解) 实时定量PCR(RT-qPCR)是一种利用荧光化学物质在每个聚合酶链式反应(PCR)循环后测量产物总量的方法,广泛应用于特定DNA序列的定量分析。以下是RT-qPCR的实验操作流程: 🔬 实验原理:Real-time PCR通过荧光信号实时监测PCR进程。在指数扩增阶段,模板的Ct值与起始拷贝数之间存在线性关...
在RT-qPCR的实验过程中,大家或多或少都会遇到扩增曲线异常、熔解曲线异常、重复性差等问题。小编给大家整理了SYBR Green染料法的常见问题及解决方案,以供大家参考。 Part 1 扩增曲线异常 正常的扩增曲线一般呈S型,Ct值最好在20-30...
RT-PCR实验代测之RT-qPCR原理! RT-PCR荧光定量分析方法-PCR实验代测,信帆生物提供PCR代测服务,包括RT-PCR,QPCR等,专业的实验检测人员加上精良的仪器,确保您的每一份实验数据均真实可靠。提供原始数据,分析数据,内参,动力扩增曲线,溶解曲线等你需要的任何资料,咨询!
2)qPCR整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低,建议通过标准曲线确认扩增效率。3)扩增产物过长,建议用三步法程序扩增或优化引物,扩增产物长度最好不超过300bp。4)体系中可能存在抑制剂影响酶的活性,建议梯度稀释模板或重新制备纯度更高的模板。2.扩增曲线无法达到平台期 ...
在RT-qPCR的实验过程中,大家或多或少都会遇到扩增曲线异常、熔解曲线异常、重复性差等问题。小翊给大家整理了SYBR Green染料法的常见问题及解决方案,以供大家参考。 Part 1 扩增曲线异常 正常的扩增曲线一般呈S型,Ct值最好在20-30之间。异常的扩增曲线包括Ct值偏大、无平台期、平台期下降等问题。
一文掌握RT-PCR..1)反应体系污染,结合NTC和NRC结果确认污染情况,建议从水,引物,酶和环境等逐一排除污染。 2)试剂暴露在强光或高温下导致试剂失效,建议用新的试剂做对比实验。
RT—PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异性引物中的一种...