作为RT-qPCR过程中的关键原料之一,逆转录酶需要具备更快的逆转录速度、更高的合成产量以及更好的耐热性能。为了获得更适用于RT-qPCR的逆转录酶,翌圣生物在M-MLV的基础上通过基因改造,开发出RNase H活性更低,热稳定性更高,持续合成能力更强的Hifair®系列逆转录酶。 图2.逆转录酶作用原理图 翌圣Hifair®系列逆...
为方便大家对逆转录引物的选择,翌圣生物通过基因工程技术开发出Hifair®III系列逆转录试剂盒,包括两种引物形式:单独成管的oligo(dT)、random primer和按比例预混的oligo(dT)、random primer。其中,按比例预混的引物仅适用与qPCR实验中。 PART 05 Hifair®Ⅲ 系列逆转录酶性能展示 1 可耐受60℃反应温度,适合具有...
逆转录PCR(RT-PCR )是先从 RNA 反转录得到 cDNA,然后再用PCR进行定量分析,具有灵敏性高、操作简单等优点,广泛应用于如传染病细菌和病毒病原体检测、动物病原体检测、癌症标志物检测、食品安全监测等等。 逆转录成功的要素 不同的mRNA转录成cDNA的效率不同,...
在RT阶段,引物在退火时与单链RNA结合,提供给逆转录酶一个用于合成的起点位置。逆转录酶利用RNA合成cDNA,得到稳定的RNA-DNA杂交链。 引物可分为三种引物Oligo引物(dT)、随机引物和序列特异性引物。Oligo引物(dT)包含锚定位点,确保引物结合至mRNA 3'端poly(A)尾部。随机引物长度6-9个碱基,在RNA转录过程中,可退火...
一步法RT-PCR中使用的基因特异性引物在较高温度下进行反转录。 3. RNase H 活性 反转录酶还具有降解DNA:RNA杂合双链中RNA的RNase H活性,降低此活性,可避免在合成较长cDNA之前模板RNA被降解掉。 野生型的M-MLV 具有RNase H活性,而通过突变去除RNase H 活性的反转录酶灵敏度更高,合成的cDNA更长。
精准诊断,从逆转录开始——高效逆转录酶助力RT-qPCR由翌圣生物科技(上海)股份有限公司发布,详细内容为:逆转录酶(ReverseTranscriptase,简称RT酶)是一种能够将RNA模板转化为互补DNA(cDNA
逆转录引物: cDNA合成通常涉及使用三种引物中的一种:Oligo(dT)引物、随机引物(Random primer)或基因特异性引物。随机引物是一种随机序列的短寡核苷酸,对于长(>4kb)或缺乏poly (A)尾巴的转录本,如原核mRNA的情况,它们可以在转录本的多个点上启动逆转录,因此,它们对于长mRNA和具有重要二级结构的转录本很有用。通常...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合，其中的“RT”是Reverse transcription（逆转录）的意思，所以RT-qPCR就是结合了荧光定量技术的逆转录PCR，即以mRNA或总RNA为模板，先反转录得到cDNA，再以cDNA为模板，通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR只可以定性，但不能进行定量分析。与RT-PCR一样，RT-qPCR...
1、前言逆转录是以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。在逆转录过程中必不可少的逆转录酶,除了其依赖RNA的DNA聚合...
RT-PCR就是逆转录PCR(Reverse transcription PCR)或称为反转录PCR(Reverse transcription-PCR,RT-PCR),是以RNA为材料应用于PCR扩增中的一种实验方法。首先通过逆转录酶将总RNA或信使RNA(mRNA)转录成互补DNA(cDNA)。其次Taq DNA聚合酶以cDNA为模板进行qPCR扩增。RT-PCR已...