-20 ℃ 保存备用。 三、PCR 取0.5 ml PCR 管,依次加入下列试剂:第一链 cDNA 2 μl;上游引物(10 pM)2 μl;下游引物(10 pM)2 μl;dNTP(2 mM) 4 μl;10×PCR buffer 5 μl;Taq 酶(2 u/μl)1 μl; 加入适量的 ddH2O,使总体积达 50 μl。轻轻混匀,离心; 设定PCR 程序。在适当的温度参数...
逆转录 - 聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR) 的原理是:提取组织或细胞中的总 RNA,以其中的 mRNA 作为模板,采用 Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA。再以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增,而获得目的基因或检测基因表...
本身是想同时铺培养皿，然后加药后6h，24h，48h，72h分别拿去裂解提蛋白。再一起做WB。但又想到一个...
因为RT-PCR 检测需要等待时间才能得到结果,目前泰国每天可以完成的测试数量平均只有6-7千例。政府制药组织(GPO)宣布将向中标者采购价值超过 6 亿泰铢的 850 万件 ATK ,中国的乐普医疗科技公司中标。结果宣布后,遭到杯葛,为此,8月13日上午,中标公司通过ZOOM予以澄清,有几十家媒体参加,负责答疑的2位分别是:1.) ...
目前全球范围处于新冠2019-nCoV大流行阶段,病毒不断变异,传统的RT-PCR检测时间比较长,对检测设备和试剂要求高,致使一些新冠患者无法快速确诊,但RT-LAMP技术可以使用简单的仪器快速检测新冠病毒,为阻断病毒传播赢得时间,助力新冠检测。 SARS-CoV-2引起的新冠肺炎(COVID-19)目前在全球范围仍处于新冠大流行阶段,病毒不断...
PCR结果的准确性受到样品采集、储存、运输和处理过程以及存储温度和时间的影响。尽管这是共识,但是这些影响因素对病毒RNA的影响缺乏探索和量化。本研究通过RT-PCR定量分析存储温度、时间对血清、口腔液和粪便中PRRSV RNA和猪内参基因(internal sample control, ISC)检测的影响。本研究中的血清(n=5)来自实验性感染PRRSV...
1RNA跑胶多长时间才能把28S,18S和5S分开,我跑了大概30分钟,出来的是一条很亮的带,这样的RNA做RT-PCR内参能出结果,但是目的基因表达不出来,是因为RNA污染或降解吗,提取过程中我已经很注意了,以前也是这样做的,就没问题呢. 2 RNA跑胶多长时间才能把28S,18S和5S分开,我跑了大概30分钟,出来的是一条很亮的带...
首先是85℃的作用是灭活反转录酶，50s肯定灭活了；其次看85℃对合成的cdna有没有影响，我觉着没有影响...
可以试一下，不过蜡块保存时间过长的话，RNA降解严重，本身RNA就比较容易降解。但是假如RNA的分子量比较小的话，还是有可能的。另外选用一些质量好的RNA提取试剂盒。