RT-PCR引物设计原则RT-PCR引物设计原则 引物长度: 17-25bp GC含量:45-55% Tm:上下游引物Tm值相差不能太大 Oligo:63-68℃Primer3:60-65℃ 序列:碱基要随机分布,尽量均匀 避免出现GC或AT富含区(尤其3'端) 避免出现多聚嘧啶、多聚嘌呤 3'端:避免出现GC或AT富含区 3'端碱基最好是G或C最好不是T 互补:...
所以引物的选取也要非常的保守,最好不要有不同的碱基,若不得不有时,也必须保证引物的3’端至少有4个碱基是完全保守才可。 在设计保守引物时,要在发表序列上分别找保守一致的区域,即在发表序列的5’端引物位置找的是3’端至少有5个bp保守,在即在发表序列的3’端引物位置找的是5’端至少有5个bp保守。 5’...
那设计引物有啥原则呢?首先,特异性得强啊!咱可不能让它乱开别的门,不然得出的结果不就乱套啦!就好比你要去开自己家的门,总不能拿着钥匙去开别人家的吧! 长度也得合适呀,太短了不稳定,太长了又不好使。这就跟挑扁担似的,太长太短都挑不好东西。还有呀,碱基组成也得讲究,不能全是一种碱基,那可不行。
RT-PCR引物设计原则和方法第五项为falseprimingsites即错误引发位点在primer5中虽然也有falsepriming分析但不如oligo详细并且oligo会给我正确引发效率和错误引发效率一般的原则要使错误引发效率在100以下当然有时候正确位点的引发效率很高的话比如达到400500错误引发效率超过100幅度若不大的话也可以接analyze中有参考价值的...
内容提示: RT-PCR 引物设计原则和方法 在 NCBI 上搜索到该基因 找到该基因的 mRNA 在 CDS 选项中 找到编码区所在位置 在下面的 origin 中 Copy 该编码序列作为软件查询序列的候选对象。 打开 Primer Premier5 点击 File-New-DNA sequence, 出现输入序列窗口 Copy 目的序列在输入框内 选择 As 此窗口内 序列也...
rt-pcr引物设计原则和方法(RT-PCRprimerdesignprinciplesandmethods)RT-PCRprimerdesignprinciplesandmethodsSearchtheNCBIforthegene,findthemRNAofthegene,locatethecodingregionintheCDSoption,andintheoriginbelow,theCopyencodesthesequenceasacandidateforthesoftwarequerysequence.OpenPrimerPremier5,clickFile-New-DNAsequence,...
PCR引物设计得黄金法则 1. 引物最好在模板 cDNA 得保守区内设计。 DNA序列得保守区就是通过物种间相似序列得比较确定得、在 NCBI 上搜索不同物种得同一基因, 通过序列分析软件(比如 DNAman)比对(Alignment),各基因相同得序列就就是该基因得保守区。 ﻫﻫ2。 引物长度一般在15~30 碱基之间。 引物长...
荧光定量PCR引物设计原则2011-04-220:21引物的具体设计要求:1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区5’端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment软件看看结果。2.产物不能形成二级结构(自由能小于58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太大。4.G+C含量在40...
【利用Primer 5 进行RT-PCR引物设计原则和方法】利用Primer 5 进行RT-PCR引物设计原则和方法-在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中,Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。O网页链接 ...