下面是RT-PCR的具体步骤: 1.提取RNA:首先从样本(可以是细胞或组织)中提取RNA。这可以通过商业RNA提取试剂盒或经典的酚-氯仿提取法来完成。提取的RNA可能含有DNA杂质,因此可以使用DNA酶I来去除DNA。 2.逆转录反应:将提取的RNA转录成互补的DNA(cDNA)的过程称为逆转录。逆转录反应的目的是将RNA转录成cDNA,并将其...
在本文中,我们将介绍RT-PCR的具体步骤,以便您更加全面地了解这种技术。 1.总RNA提取 首先需要从细胞中提取RNA。这可以通过商用试剂盒或手工方法实现。如果使用试剂盒,则遵循其说明书中的步骤。如果手工提取RNA,则需要使用三个基本试剂:细胞裂解缓冲液、氯仿和异丙醇。步骤如下: •将细胞收集在管中,加入裂解缓冲...
RT-PCR的具体步骤RT-PCR实验步骤 一.实验器具: 1.移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2.5μl 2.吸头:1ml、200μl、20μl 3.匀浆管:5ml 4.EP管:1.5ml、500μl、200μl 5.试剂瓶:棕色试剂瓶(广口,放75%乙醇) 6.量筒:100ml 7.容量瓶:1000ml 8.试管架:5ml、1.5ml、20μl 9.铝制饭盒:1...
首先加入阴性对照管(5μL无菌水),然后分别加标本RNA(每管5μL),最后加入阳性对照RNA(每管5μL)。 3、RT-PCR反应 将上述加好模板的反应管混匀,短暂离心后放入PCR仪进行RT-PCR 扩增。 4、RT-PCR产物检测 1)2.0%琼脂糖凝胶制备:称取2.0g Agarose,倒入耐热玻璃瓶内,再加入电泳液(1×TBE)100mL,轻轻混匀后...
逆转录RT-PCR操作步骤: 一、RNA逆转录cDNA(反应体系要20ul)依次加入 1、Oligo(dT)加入1ul。 2、RNA(体积即上一步骤计算出来的) 3、剩下的用无Rnase水补齐共12ul 65℃水浴5min。 二、加入逆转录试剂 1、5×Reaction Buffer 4ul 2、Ribolock RNase Inhibiter 1ul ...
1.取0.5 ml PCR管,依次加入下列试剂:第一链cDNA 2 ul;上游引物(10 pM)2 ul;下游引物(10 pM)2 ul;dNTP(2 mM) 4 ul;10x PCR buffer 5 ul;Taq 酶(2 u/ul)1 ul; 2.加入适量的ddH2O,使总体积达50 ul。轻轻混匀,离心; 3.设定PCR程序。在适当的温度参数下扩增28-32个循环。为了保证实验结果的可...
请问提完RNA后,RT-PCR的具体步骤是什么 答案 在总RNA含量中rRNA占最多,约80%.完整的总RNA样品应呈现出三条条带,分别为28S rRNA、18S rRNA、5S rRNA.其中28S rRNA条带的亮度应约为18S rRNA条带亮度的2倍,这表明RNA样品比较完整,基本无降解.如果两条带的亮度反过...相关推荐 1请问提完RNA后,RT-PCR的具...
在总RNA含量中rRNA占最多,约80%.完整的总RNA样品应呈现出三条条带,分别为28SrRNA、18SrRNA、5SrRNA...
具体的实验有具体的做法，去CNKI上查，会有收获的。