我也做得RT-PCR,是提取某物种中未测序的一段基因.是用近缘物种基因进行比对,得到保守序列设计引物,再提取总RNA,RT-PCR得到目的基因的片段 分析总结。 是用近缘物种基因进行比对得到保守序列设计引物再提取总rnartpcr得到目的基因的片段结果一 题目 做RT-PCR设计引物时,找引物序列有哪些好方法? 答案 我也做得RT...
你可能会问,怎么能保证,正好是目标DNA在大量进行复制呢?这里面起主要功能的就是这个DNA引物了。 DNA引物是根据目标DNA进行设计的,也就是它的一段序列是正好可以和目标DNA进行结合。所以,引物设计前,是需要知道病毒反转录的DNA序列。病毒的序列还有其可用的引物序列其实在很多公开文献中也都有报道了。 那如何识别目标...
RT-PCR引物序列 基因来源 引物序列 产物大小(kb) β-actin 人 有意义链CCTCG CCTTT GCCGA TCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62 kb β-actin* 大鼠 有意义链TACAA CCTCC TTGCA GCTCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62kb β-actin 小鼠 有意义链GTCGT ACCAC AGGCA TTGTG ATGG反义...
由于Poly(A+)RNA仅占总RNA 的1-4%,故此种引物合成的cDNA比随机六聚体作为引物和得到的cDNA在数量和复杂性方面均要小。 7. 基因特异性引物: 与模板序列互补的引物,适用于目的序列已知的情况。用含目标RNA 的互补序列的寡核苷酸作为引物,若PCR 反应用二种特异性引物,第一条链的合成可由与mRNA 3’端最靠近的...
RT-PCR引物设计和一般PCR引物设计可以遵循同样的原则。细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。设计理想的引物都有以下共同的特点,而设计失败的引物则各有各的缺点: ...
引物序列、 特异性的荧光DNA探针(带荧光的一段特异性的新冠病毒的核酸序列,这个是最关键的,如果特异性不强或者是病毒在这一段发生变异,则很可能会判定为阴性,影响结果)等。 目前采用RT-PCR技术(逆转录荧光PCR技术)。 (1)先从样本中提取RNA,RNA中可能...
1、.RT-PCR常用引物序列RT-PCR引物序列 基因来源 引物序列 产物大小(kb) -actin 人 有意义链CCTCG CCTTT GCCGA TCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62 kb-actin* 大鼠 有意义链TACAA CCTCC TTGCA GCTCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62kb -actin 小鼠 有意义链GTCGT ACCAC AGGCA...
采用1.5%琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物的量(取10μl扩增产物) 、引物扩增的特异性及长度 。并可根据标准DNA的量,粗略计算 PCR产物的总量。本次实验PCR产物长度: Os L29-m-PCR( A):340bp: 引物序列L29-m : up: 5’-TgCgTgTTCgCgCCCTACTT-3’;
RT-PCR是一种从细胞RNA (mRNA)中高效灵敏地扩增cDNA序列的方法,它由两大步骤组成:一步是反转录(RT),另一步是PCR。获得总RNA或mRNA后,即可进行RT-PCR。首先,在反转录酶作用下将RNA(mRNA)反转录成cDNA,以该cDNA第一链为模板进行PCR扩增,根据靶基因设计用于PCR扩增的基因特异的上下游引物,基因特异的上游引物与...
1、最根本的原因是引物之间或者自身存在互补序列。 2、模板量过低; 3、引物浓度过大; 4、退火时间过长. 问:有哪些方法可以减少引物二聚体的产生? 答:一般减少引物二聚体的方法: 1. 从引物自身着手, 重新设计引物, 这是最根本解决这一问题的办法; ...