在使用SuperScriptⅡ的逆转录反应中加入乙酰化BSA可以增加灵敏度,而且对于小量RNA,减少SuperScriptⅡ的量并加40单位的RnaseOut核酸酶抑制剂可以提高检测的水平。如果在RNA分离过程中使用了糖元,仍然建议在使用SuperScriptⅡ进行逆转录反应时加入BSA或RNase抑制剂。 7、减少基因组DNA污染 RT-PCR所遇到的一个潜在的困难是R...
解:A、由题干信息“RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的多聚酶链式反应(PCR)相结合的技术”分析可知,RT-PCR以RNA为模板来合成DNA,故该体系应含有反转录酶,A正确; B、该体系是通过控制温度使反应在体外反复进行,不需要ATP提供能量,无需加入ATP,B错误; C、PCR操作中,当温度上升到90℃以上时,双链DNA解旋为...
在配置RT-qPCR的反应体系时需要注意什么?拒绝踩坑!#PCR#反应体系, 视频播放量 541、弹幕量 0、点赞数 12、投硬币枚数 0、收藏人数 28、转发人数 0, 视频作者 细胞之邦, 作者简介 不定期更新细胞、分子、免疫学实验知识视频,让你实验操作不迷路,早日发paper,不延毕!,
用于设计PCR引物的规则同样适用于逆转录反应GSP的设计。GSP可以同与mRNA3’最末端退火的扩增引物序列相同,或GSP可以设计为与反向扩增引物的下游退火。对于部分扩增对象,为了成功进行RT-PCR,需要设计多于一个反义引物,因为目的RNA的二级结构可能会阻止引物结合。建议在20μl的第一链合成反应体系中使用1pmol 反义GSP。
因为其较高的特异性,oligo(dT)一般不需要对RNA和引物的比例及poly(A)+选择进行优化。建议每20μl反应体系使用0.5μg oligo(dT)。oligo(dT)12-18适用于多数RT-PCR。ThermoScript RT-PCR System提供了oligo(dT)20,因为其热稳定性较好,适用于较高的保温温度。
提高RT-PCR反应体系的灵敏度几个方法: 1、分离高质量RNA 成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA应保-证全长并且不含逆转录酶的抑制剂如EDTA或SDS等,以及尽可能减少基因组DNA污染。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的大值。 2、使用无RNaseH活性的逆转录酶...
因为其较高的特异性,oligo(dT)一般不需要对RNA和引物的比例及poly(A)+选择进行优化。建议每20μl反应体系使用0.5μg oligo(dT)。oligo(dT)12-18适用于多数RT-PCR。Thermo RT-PCR System提供了oligo(dT)20,因为其热稳定性较好,适用于较高的保温温度。
第第页提高RT-PCR反应体系的灵敏度方式解读RT-PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction),也称为逆转录PCR,是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。提高RT-PCR反应体系的灵敏度几个方法:1、分离高质量RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA应保-证全长并且不含逆转录酶的...
关于RT-PCR,下列说法正确的是?( )A.一步法RT-PCR的反应体系中只需加入一对特异引物即可完成整个反应B.将逆转录反应和PCR反应联合应用的一种技术C.从组织或
一般25UL反应体系中,需500ng或1ug的量,如按照1ug计算: (1)总RNA浓度一定要知道:可通过测吸光度来计算,1OD=40ug,公式如下: 总RNA浓度=OD值*40ug*稀释倍数/1000 (ug/uL) (2)所需RNA模板量为=1/总RNA浓度 (uL) 这样水的量就自然定了。