其原理是通过逆转录将RNA转化为cDNA,并利用聚合酶链式反应(PCR)扩增目标基因的序列,最终定量检测目标基因的表达水平。下面将详细介绍RT-PCR的原理。 1.逆转录(Reverse Transcription) 逆转录是RT-PCR的第一步,主要是将目标基因的RNA转化为互补的DNA,即cDNA。逆转录反应需要逆转录酶(Reverse Transcriptase)和引物(...
二、 rt-pcr检测基因表达水平的具体步骤 1. 提取RNA:首先需要从待检测的组织或细胞中提取总RNA,保证RNA的完整性和纯度对后续实验非常重要。 2. 逆转录:将提取的RNA进行逆转录反应,将RNA转录成cDNA。逆转录反应需要逆转录酶和随机引物或特异性引物。 3. pcr扩增:将逆转录后得到的cDNA进行聚合酶链式反应,使用特异...
RT-PCR实验主要包括三个关键步骤。首先，需要从细胞或组织中提取总RNA。确保使用适当的方法和试剂，以避免RNA降解。接下来，将提取的mRNA通过反转录过程转化为cDNA。此步骤是RT-PCR的基础，对于后续的PCR反应至关重要。最后，利用荧光定量PCR技术进行扩增和检测。这种方法能够精确测量特定基因的表达水平。为了...
该方法所能检测的最低 靶分子的数量可能与通常的DNAPCR相同;例如它能检测出单个RNA分子。当已知量的 转录RNA(用T7RNA聚合酶体外合成)经一系列稀释,实验结果表明通过PCR的方法可 检测出10个分子或低于10个分子,这是反映其灵敏度的一个实例。用此技术现已从不 到1个philadelphia染色体阳性细胞株K562中检测到了白血...
RT-PCR在基因表达检测中的应用基因表达谱分析利用RT-PCR技术对某一生物或细胞在特定条件下的基因表达情况进行全面分析。基因差异表达研究通过比较不同样本或不同条件下的基因表达水平,发现差异表达的基因,进而研究其功能。基因突变和SNP检测RT-PCR技术可用于检测基因突变和单核苷酸多态性(SNP),为遗传性疾病的诊断和基因...
荧光定量RT-PCR是一种高灵敏度、高特异性的检测基因表达水平的方法。通过荧光染料或探针标记的特异性引物，实现对目标基因的定量检测，具有较高的准确性和可重复性。荧光定量RT-PCR技术简介 荧光定量RT-PCR是一种高灵敏度、高特异性的检测基因表达水平的方法。通过荧光染料或探针标记的特异性引物，实现对目标基因的...
RT-PCR技术检测基因表达情况 RNA制备 逆转录 电泳检测RNA 完整性 RNA纯化 实验过程 PCR扩增 RNA制备 1)所用的玻璃器皿和金属器械均高压灭菌,经180 0 C干烤5小时, Eppendorf管(Ep管)及Tip头经DEPC水浸泡,37 0 C过夜,高压烘干 备用; 2)取适当肿瘤组织,用手术剪尽量剪碎,加1mlTriZol,放入玻璃匀浆器 中匀浆...
目的检测白血病患者骨髓单个核细胞(BMMNC)B7-H1基因的表达情况,并探讨B7-H1基因表达的临床意义。方法应用SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR法(RQ-PCR)检测74例初治白血病患者及10名正常人BMMNC B7-H1 mRNA表达情况,并跟踪检测12例化疗后获得完全缓解(CR)和5例复发患者B7-H1 mRNA表达情况。并对74例白血病患者的临床特...
RT-PCR检测血细胞中p53基因的表达ppt课件 星级: 37 页 细胞RNA的提取及鉴定、RT-PCR检测p53基因的表达 星级: 4 页 P53基因在血细胞中的表达 星级: 20 页 基因表达检测---RT-PCR 星级: 48 页 基因表达检测---RT-PCR 星级: 48 页 基因表达检测---rt-pcr 星级: 48 页 基因表达检测---RT-...
P53基因 P53基因 命名该基因编码一种分子量为53kDa的蛋白质 功能作用重要的抑癌基因，防止癌变细胞基因的修复功能 RT-PCR RT-PCR(反转录PCR技术)RNA的反转录（reversetranscription）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。基因表达的检测方法反转录的引物在GenBank中查找p53基因设计引物确定参数检测p53基因在血...