2.9 一步法同两步法RT-PCR的比较 两步法RT-PCR比较常见,在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品时易于操作,有助于减少残余污染,因为在cDNA合成和扩增之间不需要打开管盖。一步法可以得到更高的灵敏度,最低可以达到0.1pg总RNA,这是因为整个cDNA样品都...
RNA提取(用Trizol法提取)注意事项:1、整个操作过程中总是带着帽子、口罩和手套2、整个RT-PCR过程均必须使用无菌无RNA酶的制品(玻璃物品和饭盒需在180烤箱烘烤10h,注意烘烤时最好是早上开180烤箱,晚上到时间后一定要关掉,第二天早上将所需物品取出。取东西时需带好帽子和口罩,轻柔操作,防止有空气逆流入烤箱引起RNA...
逆转录RT-PCR实验操作程序及注意事项 实验操作过程中必须戴口罩、手套,实验室尽量避免人员干扰。 RT-PCR的试剂都应在冰上融化,等完全融化后再取;用过的试剂应瞬间离心后放回-20℃保存;试剂应按顺序加,加完后再混匀离心。 加入试剂前在管壁上做好标记,避免加错试剂;加过一种试剂后将EP管盖子的方向改变,避免...
【实验】普通PCR、荧光定量RT-qPCR、数字PCR的基本原理和操作方法,注意事项,SYBR GREEN, Taq Man探针, 视频播放量 10186、弹幕量 0、点赞数 385、投硬币枚数 117、收藏人数 1148、转发人数 88, 视频作者 植物百科, 作者简介 一个实验型up,偶尔猎奇。,相关视频:【荧光定
内容摘要:第一,RNA提纯,第二,RT逆转录,第三,PCR聚合酶反应,做RT前必需测RNA浓度,和PCR时的引物设计有3种方法,半定量和定量RT-PCR做的都是基因相对表达量,不是绝对表达量,以电泳为基础的半定量RT-PCR本身是不可信的,半定量RT-PCR和定量RT-PCR应该在同一个管中进行,所有的玻璃器皿均应在使用前.....
RT-PCR操作流程及其相关注意事项 +申请认证 文档贡献者 神游北海 158809 509054 3.3 文档数 浏览总量 总评分 相关文档推荐 暂无相关推荐文档 ©2021 Baidu |由 百度智能云 提供计算服务 | 使用百度前必读 | 文库协议 | 广告服务 | 企业文库 | 网站地图 | 百度营销 ...
Real-Time PCR实时定量操作注意事项 实验中养成的一些好习惯 (1)加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均 (2)移液枪用完之后要归到最大计量的位置,防止久而久之弹簧失去弹性 (3)一定要记着关水浴箱,切记切记 (4)多和大家讨论,同时多关注别人讨论的经验,这几乎是最快提高的捷径了 (5)所有的试...
操作步骤:1、均质化:单层培育的细胞,直接在培育瓶中裂解。倒掉培基,中号培育瓶中直接加入1mlTrizol试剂,加入后即频频抽吸、吹打细胞数次(约20~40次)↓室温(15~30℃)孵育5min(以利于匀浆样品中核蛋白体完整解离)↓2、相分别:↓每1mlTrizol试剂加入200ul***仿,当心盖紧管盖(单手操作;将装***仿和异丙醇的...
SYBR Green I 法进行检测时,可根据熔解曲线确认PCR产物的特异性。曲线横坐标是温度,纵坐标是荧光强度的变化值(不是强度本身)。其原理是依据温度从60度升至90度时,荧光强度的变化值。当温度达到PCR产物的Tm(双链DNA分子解链一半时的温度)时,荧光强度变化最大(峰值)。