(1)按下列组成配制RT-PCR反应液。 (2)按以下条件进行RT-PCR反应。 (3)反应结束后,取PCR反应液(5-10μL)进行琼脂糖凝胶电泳,确认RT-PCR反应产物。如果此PCR产物需要用于以后实验,必将PCR产物放于-20℃冷冻保存。 4.实验要点 参考:《RT-PCR常见问题解析》...
2、于95℃加热5～10min,灭活反转录酶,使RNA—cDNA杂交体变性,然后迅速冰浴冷却: 3、PCR扩增:方法基本同PCR。cDNA第一链合成方法:20ul反应液中含10xPCR扩增缓冲液,2ul;四种dNTP(10 mmol/L)2ul;RNA酶抑制剂20U;mRNA,l～2ug(或RNA 5-10ug);AMV,20U;引物,1u;最后用灭菌水补至20ul。 以上溶液充分混...
反转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction, RT-PCR)。其灵敏度比传统的RNA印迹法高1 000〜10 000倍,而所需时间缩短了几倍。迄今为止,RT-PCR的方法已经广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。本...
1、从RNA(或mRNA)反转录合成cDNA第一链: 2、于95℃加热5～10min,灭活反转录酶,使RNA—cDNA杂交体变性,然后迅速冰浴冷却: 3、PCR扩增:方法基本同PCR。 cDNA第一链合成方法:20ul反应液中含10xPCR扩增缓冲液,2ul;四种dNTP(10 mmol/L)2ul;RNA酶抑制剂20U;mRNA,l～2ug(或RNA 5-10ug);AMV,20U;引物,...
操作步骤 1、从RNA（或mRNA）反转录合成cDNA第一链：2、于95℃加热5～10min，灭活反转录酶，使RNA—cDNA杂交体变性，然后迅速冰浴冷却：3、PCR扩增：方法基本同PCR。cDNA第一链合成方法：20ul反应液中含10xPCR扩增缓冲液，2ul；四种dNTP（10 mmol/L）2ul；RNA酶抑制剂20U；mRNA，l～2ug（或RNA 5-10ug...