PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物...
实时荧光RT-PCR可用于新型冠状病毒的核酸检测,RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA聚合酶链式扩增反应相结合的技术,其原理是:在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合,探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团,新链延伸过程中,DNA聚合酶会破坏探针,导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT-PCR进行核酸检测...
[详解](1)根据题目信息可知,荧光PCR法基本原理是:将新冠病毒RNA逆转录为DNA,通过采用多重荧光RT-PCR技术,因此荧光PCR法所用的试剂盒中通常都应该含有:逆转录酶、热稳定性DNA聚合酶(Taq酶)、引物、四种脱氧核苷酸、缓冲体系。(2)根据PCR技术的原理,在扩增DNA分子时每一条链均需与相应的引物结合才能进行扩增,因此...
简述RT-PCR原理及核酸类型。答:首先,经逆转录酶的作用从RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。实验中所加入的特殊试剂聚丙酰胺凝胶电泳:P47-48
我国科研人员开发了常温下快速检测新冠病毒的新型PCR技术,称为逆转录重组酶聚合酶扩增(RTRPA)技术,原理见下图。重组酶与引物结合,使模板DNA无需变性即可与引物结合。子链延伸的过程中,被置换出的非模板链与单链结合蛋白暂时结合。下列关于RTRPA的叙述错误的是( )...
进行RT-PCR过程中,需要加入的酶有___。 (2)利用RT-PCR试剂盒对新型冠状病毒进行检测时,除借助上述RT-PCR技术外,还需要有特异性探针。制作该探针的依据是___,利用该探针对新型冠状病毒进行检测的原理是___。 (3)除核酸检测外,研究人员还研发了基于病毒蛋白的检测技术,该项技术的关键是生产出能与新冠病毒结合...
师姐详解从PCR到qPCR实验流程(详解) 实时定量PCR(RT-qPCR)是一种利用荧光化学物质在每个聚合酶链式反应(PCR)循环后测量产物总量的方法,广泛应用于特定DNA序列的定量分析。以下是RT-qPCR的实验操作流程: 🔬 实验原理:Real-time PCR通过荧光信号实时监测PCR进程。在指数扩增阶段,模板的Ct值与起始拷贝数之间存在线性...
【题目】PCR是利用体内DNA复制的原理,进行生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术,具体过程如图所示;5mRNA3A35cDNA335Ⅱ(1)PCR反应的基本步骤是,过程中主要借助对控制,使得化学反应有序高效地进行。(2)科学家研究发现DNA聚合酶只能催化_方向的聚合...