RT-PCR引物设计原则端不要出现2个或更多碱基的互补扩增产物大小 RT-PCR引物设计原则 RT-PCR引物设计原则 引物长度: 17-25bp GC含量:45-55% Tm:上下游引物Tm值相差不能太大 Oligo:63-68℃Primer3:60-65℃ 序列:碱基要随机分布,尽量均匀 避免出现GC或AT富含区(尤其3' 端) 避免出现多聚嘧啶、多聚嘌呤 3'...
所以引物的选取也要非常的保守,最好不要有不同的碱基,若不得不有时,也必须保证引物的3’端至少有4个碱基是完全保守才可。 在设计保守引物时,要在发表序列上分别找保守一致的区域,即在发表序列的5’端引物位置找的是3’端至少有5个bp保守,在即在发表序列的3’端引物位置找的是5’端至少有5个bp保守。 5’...
那设计引物有啥原则呢?首先,特异性得强啊!咱可不能让它乱开别的门,不然得出的结果不就乱套啦!就好比你要去开自己家的门,总不能拿着钥匙去开别人家的吧! 长度也得合适呀,太短了不稳定,太长了又不好使。这就跟挑扁担似的,太长太短都挑不好东西。还有呀,碱基组成也得讲究,不能全是一种碱基,那可不行。
Analyze中第二项为Duplex Formation,即二聚体形成分析,可以选择上游引物或下游引物,分析上游引物间二聚体形成情况和下游引物间的二聚体情况,还可以选择Upper/Lower,即上下游引物之间的二聚体形成情况。引物二聚体是影响PCR反应异常的重要因素,因此应该避免设计的引物存在二聚体,至少也要使设计的引物形成的二聚体是不...
1 RT-PCR 引物设计原则和方法 在 NCBI 上搜索到该基因 找到该基因的 mRNA 在 CDS 选项中 找到编码区所在位置 在下面的 origin中 Copy 该编码序列作为软件查询序列的候选对象。 打开 Primer Premier5 点击 File-New-DNA sequence, 出现输入序列窗口 Copy 目的序列在输入框内 选择 As 此窗口内 序列也可以直接翻...
初中语文散文阅读基础知识点+经典例题解析 专升本英语:常考动词搭配 21-01《中国近代文学史》自学考试题及答案 某公司元旦主题教育活动方案模板 廉洁过春节清风迎新村紧绷纪律弦廉洁过春节把好廉洁关过个廉洁年 小学英语实用口语100句 相关资源 RTPCR引物设计原则方法...
【利用Primer 5 进行RT-PCR引物设计原则和方法】利用Primer 5 进行RT-PCR引物设计原则和方法-在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中,Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。O网页链接 ...
RT-PCR引物设计原则RT-PCR引物设计原则 引物长度: 17-25bp GC含量:45-55% Tm:上下游引物Tm值相差不能太大 Oligo:63-68℃Primer3:60-65℃ 序列:碱基要随机分布,尽量均匀 避免出现GC或AT富含区(尤其3'端) 避免出现多聚嘧啶、多聚嘌呤 3'端:避免出现GC或AT富含区 3'端碱基最好是G或C最好不是T 互补:...
用此类引物仅产生所需要的cDNA,导致更为特异的PCR扩增。缺点是只能用于单一基因的PCR实验。PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。 上述内容罗列了RT-PCR设计的基本原则,都是些理论的知识,大家在用软件设计引物的时候可根据这些理论知识和软件设计评估结果选择...
RT-PCR引物设计原则 引物长度: 17-25bp GC含量: 45-55% Tm: 上下游引物Tm 值相差不能太大 Oligo:63-68℃ Primer3:60-65℃ 序列: 3'端: 互补: 碱基要随机分布,尽量均匀 避免出现GC或AT富含区(尤其3'端) 避免出现多聚嘧啶、多聚嘌呤 避免出现GC或AT富含区 3'端碱基最好是G或C最好不是T 引物自身...