实时荧光定量 PCR技术 实时荧光定量 PCR,简称 RT-QPCR, 属于 Q-PCR 的一种,目前该技术已得 到广泛应用,如:扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、SNP 分析等。荧 光定量 PCR 最常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法和 Taqman 水解探针的特异性方法。 SYBR Green I 是一种结合于所有 d...
RNA病毒检测试剂盒(RT-qPCR法)(英文名:ConviFlex™RT-Taq mix)用于定性检测和分析RNA病毒和RNA分子,特别适合检测新冠病毒等此类病毒。 二、描述: 1.该试剂盒为实时定量qPCR(RT-qPCR)RNA病毒检测试剂盒。 2. 试剂盒由两种组分组成: 组分1. ConviFlex™ RT-Taq Mix的冻干粉包含:MuLV逆转录酶、Taq聚合酶及...
而进行除此之外的RT-qPCR实验，都可以使用荧光染料法。表1.DNA结合染料法和TaqMan探针法对比 二、实验步骤 图5.RT-qPCR实验步骤示意图，图片来源：bing.com 1.设计引物 RT-qPCR的第一步是对靶基因设计特异性的引物，引物设计的好坏，关乎着扩增效率的高低、产物特异性的与否，所以引物设计是实验成功的第一步。引...
一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
朗基-PCR仪器-qrt-pcrwww.bioalpha2008.com/product/lj.html Q2000B荧光定量PCR 仪能够提供高灵敏度和高准确度的 RT-QPCR 实验结果。通过合理选择实验方法、严谨操作和准确分析,可以确保实验结果的可靠性和准确性。掌握该技术的基本原理和操作要点,对于提高科研水平和医学研究能力具有重要意义。
四、需用户自己准备的试剂耗材和仪器: 1.RNA病毒检测试剂盒(RT-qPCR法)(英文名:ConviFlex™ RT-Taq Mix,货号192-0025/-0100/-0250) 2.荧光定量PCR仪(qPCR仪) 3.无DNase和RNase的qPCR反应管 4.离心机 5.移液器及带滤芯吸头(不含DNase和RNase) ...
RT-qPCR包括三大步骤:RNA的提取与质量检测、逆转录成cDNA、以及实时荧光定量PCR实验。通过RT-qPCR实验,可以合成cDNA探针、获取目的基因、以及分析基因的转录水平。 RNA的提取与质量检测 从细胞、组织等样本中提取出RNA后,需要对提取的RNA的纯度、浓度、以及完整性进行评估,质检达标后才能进...
在定量反应过程中,ROX能够均一化校正仪器的光程差,移液误差或蒸发冷凝导致的体积差等,提高结果的重复性。但需要注意的是ROX的选择与仪器相关,如果qPCR仪有自动校正孔间差的功能,就不需要添加ROX,反之则需要添加ROX校正。小伙伴们在买试剂时一定要根据所用的仪器型号选择正确ROX,避免后期出错。
🧪 qPCR反应体系配置:实验通常使用2×浓缩的real-time qPCR MasterMix。需要加入模板和引物。每个样品至少做3个平行孔,以确保数据的可统计性。 💻 上机操作:将配置好的反应液放入实时qPCR仪中,设置相应的温度循环和采集模式,进行扩增检测。real-time qPCR不需要常规PCR的三步法(变性、退火、延伸)。
②一步法RT-qPCR实验应使用专门的仪器和耗材,建议在专门区域操作RNA;③一步法RT-qPCR实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12h,并高压灭菌30min后使用。3.25×QuickKing Enzyme Mix在取用之前应短暂离心收集溶液后再吸取,吸取时动做要慢,使用后应尽快放回-20℃。4.2×QuickKing One Step ...