也要注意产物长度,rtPCR 的产物长度控制在300-500bp,如果实在找不到合适引物,标准可适当放宽。 4. RT-qPCR RT-qPCR ●RT-qPCR:以 cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR 进程进行实时检测。由于在 PCR 扩增的指数时期,模板的 Ct 值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以可以定量。
1️⃣ 引物合成:引物是qPCR实验的关键,可以找专业公司设计,确保特异性。 2️⃣ 溶解引物:干粉引物需4℃离心后加水溶解至10μM工作液。 3️⃣ 配制体系:将相同试剂配成mix,便于加样,减少误差。 4️⃣ 封板操作:注意避免cDNA挂壁,影响实验结果。 5️⃣ 上机设置:延伸阶段必须添加信号搜集,确保...
实时荧光定量PCR,简称 RT-QPCR, 属于 Q-PCR 的一种,目前该技术已得 到广泛应用,如:扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、SNP 分析等。荧 光定量 PCR 最常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法和 Taqman 水解探针的特异性方法。 SYBR Green I 是一种结合于所有 dsDNA 双螺旋小沟区域的具...
实验操作时注意：所有RNA相关的操作均需要佩戴手套，防止RNase污染。严格按照试剂盒使用说明进行相关操作。按照体系配方在冰上的Rnasefree的灭菌PCR管中配置Templateprimer mix，总体系13ul。本实验是联合使用anchored oligo dT引物和随机六聚体引物进行的反转录。(1)配制NTC对照：（总13ul）水——10ul olig...
RT-qPCR是一种基因表达检测技术,原理是以cDNA为模板进行PCR扩增,并实时检测荧光信号,实现定量检测。 RT-qPCR是一种基因表
使用迈迪安专门优化设计的针对特定样本的RT-qPCR预混液,可以免除样本核酸提取的步骤,同时克服样本中抑制物的干扰,该试剂配方中含有优化的各个组分,只需要添加引物和探针即可,是针对低拷贝RNA灵敏检测的理想选择,可大大提高检测研发的时间和成本。 02 增加RT-qPCR...
(ployA); RNA提取溶液II的配方为: 盐酸胍3～5克/毫升, 异丙醇3～5毫升/10毫升, 将所述各组分按比例称量后加入DEPC处理超纯水中, 终体积为40毫升; RNA提取溶液III的配方为: 量取无水乙醇35～40毫升加入DEPC处理超纯水中使终体积为50毫升;所述RT-qPCR反应缓冲液的配方为:10×Buffer成分:三羟甲基氨基甲烷-...
翌圣生物作为研发qPCR试剂的资深厂家,匠心研发了一款高性能qPCR预混液——Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix,可以一次性解决上述实验烦恼。其中Universal ROX替代了传统ROX,弥补不同仪器平台的光程差,实现了适合所有qPCR仪器。另外,产品采用抗体法修饰,同时配方添加了基因扩增的促进因子,产品的扩...
可风干RT-qPCR和qPCR预混液是不含甘油,含有优化的风干辅料,可与风干和烘干兼容的预混液配方。该产品适用于POC诊断平台或高通量自动化平台的多重反应,可与不同的风干方法兼容,制造室温稳定的反应混合液。 对痰液样本中PCR抑制剂有高耐受性 将小鼠RNA加入到含有10%、5%或0%痰液样本的样品保存液(UTM)中, 使用可...