实验:为标准qPCR实验。 qPCR 数据输出 :LinRegPCR 可以识别两种形式的输出文件形式:RDML或者quantification Amplification result.实际上就是机器对循环数和荧光信号的实时检测值,通过对线性区段的荧光变化值分析得出扩增效率。 数据选择:理论上RDML值应该是可以用的,估计是我电脑的问题软件并不能识别RDML,所以我已excel输...
一、样本质量是 RT-qPCR 实验成功的关键因素之一 使用高纯度(不含 DNA 和蛋白质及抑制物)和高度完整(无降解)的 RNA进行实验是整个 RT-qPCR 实验流程中很关键的环节。降解或污染的 RNA 会产生低质量的 cDNA,从而导致 qPCR 反应效率低下,并导致不准确的低质量数据,具体表现为: ●RNA 不纯将导致对下游 PCR 反...
在一项针对冷冻浆果的检测中,科研人员首先利用RT-qPCR快速筛查出可能含有食源性病毒的样品。随后,采用WGS对RT-qPCR检测出阳性的冷冻浆果样本进行深度测序。通过比对已知病毒基因组,不仅确认了RT-qPCR结果的准确性,还进一步分析了病毒的基因型和变异情况,为后续的病毒防控提供了重要信息。 图1 样品制备、RNA分离、PCR检测...
常用的方法是2^-△△Ct方法计算。Cq=Ct,两者是一个 意思。本文主要讲述内容：
常用的方法是2^-△△Ct方法计算。Cq=Ct,两者是一个 意思。 本文主要讲述内容: 2^-△△Ct的计算方法 参考资料: 1 文献 2-△△Ct=2-[(处理组Cq-内参cq)-(对照组Cq-内参Cq)] 详细公式原理,可以看参考链接和参考文献。 当具有多个生物学和技术重复时,先单独求,之后求平均值。
常规的qPCR流程是:样品采集-运输-样品处理-核酸提取-反转录(RNA病毒)-扩增-结果读取。 检测出现阴性结果时,例如无扩增或Ct值偏大,我们需要判断的是反应是真的没有检测的目的基因表达呢,还是某个环节出现问题了呢? 通常来说引起假阴性结果的原因可能出现在以下几个环节: ...
5、RT-qPCR验证差异表达miRNA 选择十六个差异表达的miRNA,通过RT-qPCR验证miRNA测序结果的可靠性。分析结果如图6所示:miR-200b、miR-103、miR-107、miR-148a、miR-30b、miR-30d、miR-200a、let-7b、miR-30a-3p和miR-30a-5p在空杯期绵羊乳腺组织中的表达比在泌乳高峰期中低。然而,miR-125b、miR-493-5p、mi...
某天分析384板数据觉得有点耗时,恰逢R语言刚入门1周,觉得可行,于是行动 在此感谢生信技能树和小洁老师! 保存384板结果为csv 个人习惯每次做两个复孔,上下为同一孔,每个引物占两行 每次可运行8个引物,每个引物总样本量最大为24 数据示例: image.png
RT-qPCR得到的结果包括Ct,ΔCt。由于暴露人群和对照人群只是大体的分组,并未进行一一配对,所以无法得到ΔΔCt,所以也无法得到2-ΔΔCt。在这种情况下,如何才能进行比较? 查看完整版本请点击这里: 【求助】RT-qPCR关于结果分析中2-ΔΔCt的疑问 最新回复 ...