再看溶解曲线,溶解曲线应该只有一个峰值,而且峰值的位置是在Tm附近,距离Tm较远,或存在多个峰值则需要重新设计引物。最后,如果怀疑仪器传感器问题,可以将QPCR产物做琼脂电泳,如果引物能扩增片段,会在80-250bp附近出现一个条带。 5、QPCR结果为什么没有差异? 可能是实验操作出现的问题,很多人存在一个误区,认为逆转录时...
一、样本质量是 RT-qPCR 实验成功的关键因素之一 使用高纯度(不含 DNA 和蛋白质及抑制物)和高度完整(无降解)的 RNA进行实验是整个 RT-qPCR 实验流程中很关键的环节。降解或污染的 RNA 会产生低质量的 cDNA,从而导致 qPCR 反应效率低下,并导致不准确的低质量数据,具体表现为: ● RNA 不纯将导致对下游 PCR ...
一、样本质量是 RT-qPCR 实验成功的关键因素之一 使用高纯度(不含 DNA 和蛋白质及抑制物)和高度完整(无降解)的 RNA进行实验是整个 RT-qPCR 实验流程中很关键的环节。降解或污染的 RNA 会产生低质量的 cDNA,从而导致 qPCR 反应效率低下,并导致不准确的低质量数据,具体表现为: ●RNA 不纯将导致对下游 PCR 反...
IDT-qPCR primer design Fig2 IDT在线引物设计工具页面 Fig3 结果页面展示 lncRNA引物设计: lncRNA:和mRNA的步骤一致。 miRNA:茎环法原理:由于miRNA全部为23nt左右的短序列,无法进行直接PCR检测,所以使用了茎环序列这个工具,茎环序列是一段50nt左右单链DNA,可以自身形成发卡结构,3’末端可以设计成与miRNA部分片段互...
师兄,我想问一下,我想用qPCR数据做个热图,但是我的数据control组的2-△△Ct值的均值算出来都会在1的上下浮动,就导致热图中control那一列颜色不均一,处理组上下调信息没有那么直观。我有看到别人文章里面control组都是1,没有上下浮动的情况,请问这是怎么做到的呀,是在算-△△CT的时候就将control组的三个技术重...
通过前期单细胞转录组分析,我们发现在表达该受体的癌细胞中,某基因变化差异显著,因此我们利用qPCR进行了相关检测。经查阅文献,我们选择了不同浓度的受体激动剂进行不同时间的处理,发现在2uM浓度处理48h时,该基因显著下调。给我们后续探究该受体在肿瘤发生发展中的作用机制提供了前期的参考依据。数据分析模板:...
在进行RNA提取时,我们得到的RNA中可能会混入未被清除干净的基因组DNA(gDNA),因此,逆转录之后的cDNA中也会混有gDNA。在进行下游qPCR实验反应时,cDNA和gDNA可能会被同时扩增,以致CT值偏小,因此结果可能会存在偏差。 那这种情况怎么办呢? 小V建议: (1)对逆转的RNA进行基因组清除处理,基因组清除可以在RNA提取时使用...
在一项针对冷冻浆果的检测中,科研人员首先利用RT-qPCR快速筛查出可能含有食源性病毒的样品。随后,采用WGS对RT-qPCR检测出阳性的冷冻浆果样本进行深度测序。通过比对已知病毒基因组,不仅确认了RT-qPCR结果的准确性,还进一步分析了病毒的基因型和变异情况,为后续的病毒防控提供了重要信息。
给我们后续探究该受体在肿瘤发生发展中的作用机制提供了前期的参考依据。数据分析模板: 3.png qPCR结果的可视化图片如下,两天手搓一张发表级图片: 4.png 小小的记录一下两天的学习过程:点击查看原文视频 反馈 实验室目前还是百业待兴,大家有什么想法可以填写问卷跟咱反馈反馈:...
RT-qPCR是由三个步骤组成RT-qRCR影响分析可靠性关键点(Key porint) 关键词:荧光实时实时荧光定量PCRRT-qPCRRT-PCR反转录定量PCRQRT-PCR 方法简介 所谓的实时荧光定量PCR就是通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量PCR反应中,引入了一种荧光化学...