一、样本质量是 RT-qPCR 实验成功的关键因素之一 使用高纯度(不含 DNA 和蛋白质及抑制物)和高度完整(无降解)的 RNA进行实验是整个 RT-qPCR 实验流程中很关键的环节。降解或污染的 RNA 会产生低质量的 cDNA,从而导致 qPCR 反应效率低下,并导致不准确的低质量数据,具体表现为: ● RNA 不纯将导致对下游 PCR ...
IDT-qPCR primer design Fig2 IDT在线引物设计工具页面 Fig3 结果页面展示 lncRNA引物设计: lncRNA:和mRNA的步骤一致。 miRNA:茎环法原理:由于miRNA全部为23nt左右的短序列,无法进行直接PCR检测,所以使用了茎环序列这个工具,茎环序列是一段50nt左右单链DNA,可以自身形成发卡结构,3’末端可以设计成与miRNA部分片段互...
在一项针对冷冻浆果的检测中,科研人员首先利用RT-qPCR快速筛查出可能含有食源性病毒的样品。随后,采用WGS对RT-qPCR检测出阳性的冷冻浆果样本进行深度测序。通过比对已知病毒基因组,不仅确认了RT-qPCR结果的准确性,还进一步分析了病毒的基因型和变异情况,为后续的病毒防控提供了重要信息。 图1 样品制备、RNA分离、PCR检测...
5、RT-qPCR验证差异表达miRNA 选择十六个差异表达的miRNA,通过RT-qPCR验证miRNA测序结果的可靠性。分析结果如图6所示:miR-200b、miR-103、miR-107、miR-148a、miR-30b、miR-30d、miR-200a、let-7b、miR-30a-3p和miR-30a-5p在空杯期绵羊乳腺组织中的表达比在泌乳高峰期中低。然而,miR-125b、miR-493-5p、mi...
RT-qPCR是分子生物学的基础实验,想必大家都很熟悉了,主要包括三大步骤:RNA提取、逆转录成cDNA以及实时荧光定量PCR,但有时下机数据不理想,重新跑了几板也无济于事,到底是怎么回事呢?很可能是逆转录实验出了问题!虽然看起来逆转录实验只需将RNA、dNTP、引物、逆转录酶加入离心管中混匀,进行反应即可,但是在实际操作...
保存384板结果为csv 个人习惯每次做两个复孔,上下为同一孔,每个引物占两行 每次可运行8个引物,每个引物总样本量最大为24 数据示例: image.png 代码语言:text 复制 rm(list = ls()) #!!!修改参数!!! dat <- read.csv(file = "ct_value_2.csv",header = F) #文件名 ...
8.RT-QPCR大家都用什么做标准曲线(标准曲线,扩增效率,标准品,反转录)9.pcr-sscp法(pcr-sscp,凝胶,单链,玻璃)10.【心得】Primer3中几个参数设置问题(参数设置,引物,互补性,设计引物)11.实时荧光PCR检测技术(荧光,探针,扩增产物,核酸)12.荧光标记引物的稳定性问题?(引物,荧光标记,峰值,荧光强度)13...
常规的qPCR流程是:样品采集-运输-样品处理-核酸提取-反转录(RNA病毒)-扩增-结果读取。 检测出现阴性结果时,例如无扩增或Ct值偏大,我们需要判断的是反应是真的没有检测的目的基因表达呢,还是某个环节出现问题了呢? 通常来说引起假阴性结果的原因可能出现在以下几个环节: ...
1303-Z4），内参是IN目的 Z4 当然这两次用的阳性植株是不同株，但表达差异很大，到底哪里有问题 ...