亦可参考国家生物信息中心建立的RT-qPCR内参基因数据库:https://ngdc.cncb.ac.cn/icg/。 ▶ 使用多个内参基因 无论选择哪个内参基因,在不同条件下单个基因的表达水平始终存在一定差异,最好的策略是使用2个以上的内参基因。对人肺癌基因表达水平的研究表明,联合使用3-4个基因作为内参可以大幅提升稳定性(图3)。 图3
1.不同板子之间的CT值不建议进行比较，有时候确实会有一些差异，2.一般CT值超过30实验结果重复性也会...
新型稳定内参基因的挖掘：福建农林大学菌物研究中心的研究人员在《Journal of Fungi》期刊上发表了一篇重要论文，通过RNASeq技术，成功挖掘出适用于丝状真菌RTqPCR的新型稳定内参基因。传统内参基因稳定性不足：研究发现，传统常用的内参基因如ACTB、βTUB和GAPDH，在丝状真菌的不同试验中稳定性不足，这影响了...
1.2.2 候选内参基因的 RT-qPCR 分析根据 FinePure Plant RNA 提取试剂盒说明书提取无患子 样品的总 RNA,并采用 1% 琼脂糖凝胶电泳检测每 个样品的 RNA 质量,然后使用 NanoDrop 2000 分光 光度计检测 RNA 的浓度及纯度, 要求 A260/A280 值在 1.8-2.1 之间.使用反转录试剂盒 Goldenstar RT6 cDNA Synthesis ...
根据文献和糙皮侧耳基因组数据,选择14个糙皮侧耳基因为候选内参基因,根据候选内参基因的编码序列,通过Primer premier 5软件进行RT-qPCR引物的设计,引物长为18～27 bp,产物长为80～150 bp(表1)。所需引物由浙江尚亚生物技术有限公司合成,并进行PCR试验测验其...
RT-PCR和qPCR实验内参基因选择 内参基因概念和作用 内参基因的选择 参考示例 目录 加入标题入标题加入标题 内参即为内部参照,内参基因则是在检测目的基因从DNA到 mRNA表达过程中可用来当作参照的基因。内参基因通常是表 达稳定的管家基因。 内参基因概念和作用 ...
qPCR 内参基因选择——【RT-PCR技术】RT-PCR和qPCR实验内参基因选择 目录 ➢内参基因概念和作用➢内参基因的选择➢参考示例 ➢内参基因概念和作用 加内入参标即题为内部参照，内参基入因标则题是在检测目的基因从D加NA入到标题 mRNA表达过程中可用来当作参照的基因。内参基因通常是表达稳定的管家基因。➢...
使用BestKeeper统计算法来识别最稳定的参考基因,其中HMBS在HCC组织和血液样本中都是最稳定的。因此,本研究的结果表明,HMBS是HCC相关研究中相对定量RT-qPCR技术标准化的一个有前途的参考基因。 Ahn HR, Baek GO, Yoon MG, et al. HMBS is the most suitable reference gene for RT-qPCR in human HCC tissues and...
Reference Genes Selection and Validation for RT-qPCR in Sapindus mukorossi XU Yuan-yuan, ZHAO Guo-chun, HAO Ying-ying, WENG Xue-huang, CHEN Zhong, JIA Li-ming 生物技术通报 . 2022, (10): 80 -89 . DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2021-1616 ...
研究通过RNA-Seq技术，挖掘出适用于丝状真菌RT-qPCR的新型稳定内参基因，以提升实验结果的准确性。RT-qPCR技术在分子生物学中扮演着关键角色，内参基因的选择对其结果的可靠性至关重要。研究人员发现，传统常用的内参基因如ACTB、β-TUB和GAPDH，在不同试验中稳定性不足。因此，他们决定寻找更稳定的内参基因...