RT-PCR数据分析另外如果目标基因和内参基因有相近的扩增效率但是扩增效率不等于2那么2ctlivak方法的公式可以修正为实际的扩增效率代替公式中的2 RT-PCR数据分析 RT-PCR数据分析方法(相对定量) 1.以质量单位作为标准进行相对定量 条件:要求准确地量化初始材料,如细胞数目或核酸的微克数。 当用相对定量法比较多个样本时...
-选择合适的内参基因对于正确解读RT-qPCR结果至关重要。 5.数据分析: -数据分析时,应考虑实验的重复性、样本间的变异性和统计学显著性。 -应使用适当的统计测试来确定结果是否具有统计学意义。 6.质量控制: -质量控制包括检查RNA的完整性、纯度和浓度,以及PCR扩增的效率和特异性。 -应使用阴性对照和阳性对照来验...
5. 如果前面的几项都没有太大的问题的话。最后我们看看最重要的结果,也就是目的基因的变化情况了。在内参与对照组选择没错的情况下,点击 gene expression 选项,选中你想查看的样品孔的基因表达情况。 好了,这次的 RT-PCR 看图分析就到这里。最后需要注意的是图中的结果还需要输出进行后续的自行运算得出结果。图...
3. PCR . 这是个很精细的体系,酶, dNTP ,Mg的浓度适中才能达到最好的效果,有人说PCR不能像炒菜那样,喜欢多放点盐就多放点,喜欢多放点油就多放点,PCR对成分很在乎,这就是PCR难重复的原因,如果总体系少于25ul ,各种成分的量就更不好控制,因为0.3ul ,0.5ul ,本身加样的时候误差就很大,所以少于25ul的体...
本研究主要分析了RT-PCR检测NG、UU和CT及MG结果,现做如下总结。1 一般资料与方法 1.1 一般资料 选择我院妇科和泌尿外科于2016年6月~2017年7月拟诊为泌尿生殖道感染患者的宫颈或者尿道分泌物标本425例,男女人数分别为190例、235例;患者年龄为20~63岁,平均年龄为(41.6±5.2)岁。标本采集前应对患者的...
荧光定量PCR实验FAQ 1、如何处理QPCR结果? 比较CT法 根据基因表达量的计算公式,基因表达量=2^-△△Ct,其中△△Ct=△Ct(实验组)-△Ct(对照组) 例如: 验证基因A的敲低效果,实验分为两组:对照组和实验组。每个样本设置三个复孔,通过PCR仪的检测得到Ct值,先根据公式计算出△△Ct值,再计算出基因的表达量,取...
PCR反应的扩增效率严重的影响到PCR的结果,同样在qRT-PCR中,扩增效率对定量的结果尤为重要,除去反应液(reaction buffer)中其他物质及机器和protocol带来的影响,引物的质量对于qRT-PCR的扩增效率影响也非常大,为了保证结果的准确性,无论是相对荧光定量还是绝对荧光定量均需要对引物的扩增效率进行检测,而公认的有效的qRT-...
分析总结。 引物设计的问题我发现primer5和oligo7验证的结果很不一样啊primer5设计出来的引物用oligo验证都不太好oligo设计出来的引物用primer5验证都很差所以我没敢自己设计还是找了很多文献用oligo验证我选择的几对引物中虽然有的显示会形成二聚体但g都比较低在pcr那个选项出来的结果中也都没有提示说明应该可以接受...
1、标本类型如何影响RT-PCR结果? 1.1、上呼吸道标本 大多数RT-PCR标本是用鼻咽拭子从上呼吸道收集的,尽管口咽拭子和最近的唾液也可以使用。灵敏度和时间过程被认为在所有三种样本类型中是相似的。 这些样本在症状出现后的第一周内最为准确,病毒载量在接下来的几周内下降。症状出现后的四周,RT-PCR更可能是阴性...