优点 高灵敏度：RT-PCR技术能够检测到极低浓度的RNA样品，使得微量RNA的分析成为可能。高灵敏度有助于早期发现和诊断病毒感染或其他RNA相关的疾病。高特异性：通过设计特定的引物，RT-PCR试剂盒可以特异性地扩增目标RNA序列。这有助于避免非特异性扩增，提高检测结果的准确性。用途广泛：RT-PCR试剂盒可用于分析基因的...
优点：1.中间产物 cDNA 能够建立可以长期保存，并用于多次反应的稳定的cDNA库;2. 通过oligo dT和随机引物，可以从单个RNA样本中扩增多个靶标，而不需要多重cDNA库;3. 方便对下游条件优化调整，灵活性强;4. 试验成本低。缺点：1. 更多的移液步骤会增加DNA污染的风险，并且耗时;2. 相较于一步法，需要进行更多的...
由于这种检测方式具有比传统荧光定量 PCR 更加出色的灵敏度和精确性,数字 PCR迅速得到广泛的关注,尤其在痕量核酸样本检测、复杂背景下稀有突变检测、核酸拷贝数变异和基因表达量微小差异鉴定方面表现出的优势已被普遍认可。 优点:实现绝对定量,更高的敏感性和特异性,可以检测低拷贝样品 缺点:仪器设备和试剂昂贵,操作复杂...
RT-PCR的主要优点是灵敏度高、特异性强,可以检测微量的RNA样品。缺点是操作繁琐、耗时较长,且存在假阳性和假阴性结果的可能性。 总结 RT-PCR是一种重要的分子生物学技术,在医学、诊断、基础研究等领域有着广泛的应用。随着技术的不断发展,RT-PCR的灵敏度、特异性和自动化程度都得到了不断提高,在未来将发挥更加...
优点:价格相对较低;使用方便;对DNA模板没有选择,通用性好;检测灵敏度高。 缺点:可能产生假阳性结果,需要通过熔解曲线分析识别扩增产物的特异性;需要不断优化反应体系以降低非特异性扩增;不适合进行多重qPCR检测。 ②荧光探针法(TaqMan技术):TaqMan探...
换句话说,每当扩增一条DNA,就会形成一个荧光分子,PCR产物的形成与荧光分子的形成完全同步,PCR产物越多,累积的荧光信号就越多,荧光强度就越强。 荧光探针法的优点:具有强大的特异性检测能力;高灵敏度;非常适合于进行多重qPCR检测;在PCR之后无需进行任何处理,从而节省时间和原料成本。
1. 优点:rt-pcr检测基因表达水平的灵敏度高,可以检测低表达基因;检测结果定量化准确,能够得到基因的具体表达量;方法简单、快速、高效,适用于大规模的基因表达分析。 2. 缺点:需要严格控制反应条件和引物设计,以避免假阳性结果;受到RNA的完整性和纯度的影响,需谨慎处理RNA样本;无法区分剪接异构体,对于复杂基因的表达...
优点:检测特异性强;灵敏度高;适合进行多重qPCR检测;PCR后续无需处理,节省时间和原料成本。缺点:需要根据不同的序列,合成不同的探针;探针的水解依赖Taq酶外切酶的活性,定量时容易受试剂和酶性能影响;淬灭难以彻底,本底较高;检测结果很难判断实际的扩增特性。图3 荧光染料法和荧光探针法的工作原理(Cao et al., ...