原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。RT- PC
RT -PCR即逆转录-聚合酶链反应。原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于:分析基因的转录...
因此在提取RNA时,应尽量创造一个无RNA酶的环境,包括去除外源性RNA酶污染和抑制内源性RNA酶活性,主要是采用焦碳酸二乙酯(DEPC)去除外源性RNA酶,通过RNA酶的阻抑蛋白Rnasin和强力的蛋白质变性剂如异硫氰酸胍抑制内源性RNA酶。 RT-PCR步骤: 1、RNA的提取: 2、cDNA的合成: 逆转录体系的组成: 3、PCR扩增: 50ul PC...
RT-PCR用于对表达信息进行检测或定量。另外,这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术,更灵敏,更易于操作。逆转录反应可以使用逆转录酶,以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物(GSP)起始。RT-PCR可以一...
PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物...
实时荧光RT-PCR可用于新型冠状病毒的核酸检测,RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA聚合酶链式扩增反应相结合的技术,其原理是:在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合,探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团,新链延伸过程中,DNA聚合酶会破坏探针,导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT-PCR进行核酸检测...
1. RTpcr RTpcr技术的基本原理是先利用逆转录酶将目标RNA转录成cDNA(亦称为反转录,即逆转录),然后以cDNA作为模板进行PCR扩增。整个过程分为两个关键步骤:逆转录和PCR反应。 2. 逆转录过程是RTpcr技术的第一步,其目的是将RNA转录成cDNA。逆转录酶是这一步的关键酶类,它能够将RNA作为模板,并合成相应的cDNA。
RTPCR在食品安全领域的应用RTPCR技术可以用于检测食品中的致病菌、转基因成分、有害物质等,保障食品安全。RTPCR在环境检测领域的应用RTPCR技术可用于环境中的微生物监测、污染物检测和资源评价等方面,为环境保护提供重要支持。RTPCR技术原理1RTPCR技术实验室的安全与环保RTPCR实验室应具备安全操作规范,使用防护设施,对...