逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。作用 RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极...
RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avian myeloblastosis virus，AMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murine leukemia virus，MMLV）反转录酶。在完成逆转录过程之后，通过PCR进行定量分析的时候，随着技术的...
答:原理:即逆转录PCR,先在逆转录酶的作用下以mRNA为模板合成DNA,再以cDNA为模板进行PCR反应。这样低浓度的mRNA被扩增放大易于检测。是一种快速、简便且敏感性极高的检测RNA的方法,可用于分析基因的转录产物、克隆cDNA及合成cDNA探针、改造cDNA序列等。 RT-PCR过程:1、mRNA,引物和逆转录酶以及适当的缓冲体系在70C5...
1. PCR仪 2. PCR管 3. 微量移液器 【操作方法】 一、逆转录 1)逆转录RT反应体系构成: 2)涡旋混匀,42℃反应1小时,95℃加热5分钟,然后置于冰上。 二、PCR扩增 1) PCR反应体系构成 2)将上述反应体系涡旋混匀, 按下列程序运行循环 Step2-4运行30个循环,其中复性温度主要依据引物的不同而不同。
三、PCR技术是基于DNA/cDNA为摸板的扩增过程 PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与...
RT-PCR(逆转录PCR)操作和原理, 视频播放量 1.4万播放、弹幕量 0、点赞数 168、投硬币枚数 37、收藏人数 412、转发人数 141, 视频作者 生物使容快乐, 作者简介 小小生物老师一枚~,相关视频:PCR、RT-PCR、qRT-PCR终于能分清了!,RT-PCR大白话科普～,实验员小哈&实验系列 -
1、RT-PCR原理与实验步骤 一、知识背景: 1、基因表达:DNA RNA Protein 单拷贝基因表达存在逐步放大机制,如一个蚕丝心蛋白基因 104个丝心蛋白mRNA(每个mRNA存活4d,可以合成105个丝心蛋白) 2、0; 共合成109个丝心蛋白 。因此单拷贝基因的mRNA表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。 2、PCR技术(...
【实验】酿酒酵母电击转化原理,操作方法,涂板,菌落PCR 37:35 【实验】丝状真菌的孢子悬液制备操作方法 24:53 【实验】丝状真菌的原生质体制备实验操作 45:40 【实验】PEG介导的丝状真菌的原生质体转化实验操作流程 40:20 【实验】液氮研磨菌丝的操作方法 06:05 【实验】丝状真菌基因组DNA的提取原理,操作...
一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...