RT-PCR技术操作流程 简介 RT-PCR是利用反转录酶催化dNTPs聚合成与mRNA模板互补的单链DNA(即cDNA)，以cDNA为模板在PCR反应系统中进行扩增，然后通过琼脂糖凝胶电泳法检测RT-PCR产物，从而间接检测mRNA的方法。工具/原料 PCR仪、台式离心机、低温高速离心机、旋涡混匀器、稳压稳流电泳仪、水平电泳槽、紫外凝胶分析系统等...
RT-PCR全过程步骤一.试剂材料准备1、塑料制品:(包括枪头、EP管、匀浆管等)先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中,将塑料制品逐个浸泡其中,其中小枪头需要吸管打入DEPC水,过夜,然后高压,再烤干备用,实验前将枪头等放入吸头台,再高压一次(EP管)2、玻璃制品:泡酸过夜,冲洗干净,蒙锡纸烤干备用(DEPC水泡)(洗净后先泡...
RT- PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)即逆转录PCR,是将RNA的逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应(PCR)相结合的技术。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞/组织中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列等。
下面将介绍RT-PCR的操作流程。 首先,准备实验所需的试剂和设备,包括RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒、热循环仪等。确保所有试剂和设备都处于干净、无菌状态。 第二步是提取RNA样本。将待检测的样本(如血液、组织等)加入RNA提取试剂盒中,按照试剂盒说明书的指导进行RNA提取。提取后的RNA样本应该是纯净的,...
rt-pcr操作流程rt-pcr操作流程如下: 1.RNA提取:从样品(如细胞、组织、血液、唾液等)中提取RNA,可以使用商业RNA提取试剂盒或自制方法。 2.cDNA合成:利用逆转录酶(Reverse Transcriptase)将RNA转录成cDNA(DNA的互补链),可以使用商业RT试剂盒或自制方法。 3.建立标准曲线:制备一系列已知浓度的标准品,用以构建标准...
实验操作流程: 1.用新鲜提取的 RNA 反转 录合成 cDNA 第一链,然后进行实时荧光定量 PCR,其中包括:SYBR Green 反 应体系的配置;PCR 程序设置;运行 PCR 实验,样品编辑和结果分析。 2.反转录反应 : 反转录合成 cDNA 第一链实验操作时注意:所有 RNA 相关的操作均要佩戴手套,防止 RNase 污染。
3、逆转录酶和RT-PCR逆转录酶(reversetranscriptase)是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶,至少具有以下三种活性:1、依赖RNA的DNA聚合酶活性:以RNA为模板合成cDNA第一条链;2、Rnase水解活性:水解RNA:DNA杂合体中的RNA;3、依赖DNA的DNA聚合酶活性:以第一条DNA链为模板合成互补的双链cDNA.4、引物的设计及其...
1【题文】目前采用RT-PCR技术(逆转录荧光PCR技术)进行新冠毒核酸检测,操作流程:从密接者组织中提取RNA→将RNA逆转录为cDNA→PCR扩增cDNA→DNA分子杂交进行核酸检测→通过荧光强度判断是否含有病毒核酸。“核酸检测试剂盒实际上是盛放有几种关键试剂的盒子,比如:特异性的荧光DNA探针(特异性的带荧光的病毒核酸序列)逆转...
RT-PCR实验操作流程 上海信帆生物提供PCR实验代测,实时荧光定量PCR实验代测,RT-PCR代测。客户只需要提供样本,其他所有试剂都由本公司提供。一般7-10天出结果,提供原始数据,分析数据,实验报告,实验室所用仪器型号,图片,动力扩增曲线等。 RT-PCR实验外包,mRNA、miRNA、lncRNA、DNA实验代测 ...