逆转录PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。技术介绍 由一条RNA单链转录为互补DNA（cDNA）称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆...
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。作用 RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极...
RT-PCR已被广泛应用于多种分子生物学应用中,包括基因表达分析、基因测试、RNA干扰验证检测、微阵列验证、病原体检测和疾病研究。 RT-PCR的方法之一步法和两步法 RT-PCR其操作方法分为两种,即一步法和两步法。一步法RT-PCR,逆转录同PCR扩增结合在一起,即cDNA合成与...
定义:RT-PCR是逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription PCR),一种将RNA转录为cDNA后在体外进行DNA扩增的技术。RT-PCR技术结合了反转录和PCR两个步骤。 应用:RT-PCR主要用于RNA分子的扩增和检测 04 RT-qPCR 定义:RT-qPCR是逆转录实时...
(1)普通PCR技术 普通PCR即第一代PCR技术,以双链DNA为模板,以dNTP为底物进行扩增,特异性地扩增双链DNA的过程,然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析。 PCR的过程大致可分为高温变性、低温退火、适温延伸三个基本反应步骤。 ① 高温变性:双链DNA模板经过高温(95℃左右)加热一定时间(10~30s)后,双螺旋的氢键断...
RT-PCR实验通常包括以下步骤: 1)样品制备:将RNA提取出来,并进行纯化; 2)引物设计:根据目标RNA的序列设计特异性引物; 3)反转录:使用反转录酶将RNA转化为cDNA; 4)PCR扩增:利用PCR技术对cDNA进行扩增; 5)测序分析:对扩增后的产物进行测序分析,以确认其序列。
然而,各种PCR技术,包括PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR和dPCR,长得实在是太像了,好多同学看得头晕眼花也没弄明白这几种PCR有什么区别。
收起 1 各类 PCR ，分不清？2 常规 PCR 3 实时荧光定量 PCR (qPCR)基本步骤：3.1 SYBR Green 3...
一、RT-PCR操作步骤 1. RNA抽提 方法:TRlzol法。 主要成分:苯酚(具有裂解细胞和变性蛋白的作用)。 RNA抽提前准备:试剂耗材准备(注意RNase free)、样品的准备。 步骤:样品+1ml TRlzol室温裂解10min+200μL氯仿振荡30s后室温静置2-3 min;4℃低温离心(12 000g×20min);400μL上层水相+600μL异丙醇室温沉淀10...