一、按下列组成在PCR 反应管中调制反应液 Reagent Quantity,for 50µl of reaction mixture 10×One Step RNA PCR Buffer 5µ l 25 mM MgCl2 10µ l 10 mM dNTP mix 5µ l RNase Inhibitor (40 U/µ l) 1µ l AMV-OptimizedTaq 1µ l AMVRTaseXL (5 U/µ l) 1µ l 上游特异...
先做好mixture: 5×reaction buffer:4ul×___管,dNTP: 2ul×___管,RNase抑制酶:1u l×___管,RT酶 1ul×___管。 再等分为___份,8ul/份,加入各管中,混匀(离心,振荡,再离心)。 37°C 5分钟。42°C 60分钟。70°C 10分钟。冰水浴,3分钟。
PyrobestTM DNA Polymerase也是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶,其特点是保真性极高,扩增得到的PCR产物为平滑末端。如果进行基因的扩增请使用此酶。 1. 按下列组成在PCR反应管中调制反应液: TaKaRa TaqTM或TaKaRa EXTaqTM的配方: ReagentQuantity, for 50µl of reaction mixture 10X PCR buffer (Mg2+ fr...
RT-PCR提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的信使RNA弄出来,更重要的是,RNA太容易分解了,环境中无处不在的RNA酶,以及其容易被水解的特点啊,我们不得不尽快把珍贵的信使RNA转化成稳定的形式,于是就有...
Reaction mixture for RNA quantification of cereal virus using Real-time RT-PCRJAROSOVA JANAKUMAR JIBAN
聚合酶链反应( polymerase chain reaction, PCR)在体外快速扩增DNA片段,随着各种高保真、热稳定DNA聚合酶如Taq DNA聚合酶(简称Taq酶)在PCR中的应用,以及各种PCR仪的出现,PCR技术已经成为一种成熟 、高效、应用广泛的分子生物学常用技术。 PCR反应分为三个阶段: ...
表2 荧光PCR反应体系及反应条件Table 2 Real-time PCR reaction mixture and amplification parameters 图1 阳性样品及阴性对照的融解曲线A-I:分别代表引物1-9Fig.1 Dissociation plots of amplification products for positive samples and negative controlA-I:refers to primer pair 1-9 respectively ...
3. A real-time PCR reaction mixture can be either 50ml or 25ml. Prepare the following mixture in each optical tube. 25ml SYBR Green Mix (2x) 0.5ml liver cDNA 2ml primer pair mix (5 pmol/ml each primer) 22.5ml H2OOR12.5ml SYBR Green Mix (2x) ...
逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品...
Reverse Transcription is carried out with the SuperScript First-Strand Synthesis System for RT-PCR. The following procedure is based on Invitrogen’s protocol. 1. Prepare the following RNA/primer mixture in each tube: Total RNA 5 mg random hexamers (50 ng/ml) 3 ml ...