有谁知道做RT-PCR需要哪些试剂?不买试剂盒的话, 相关知识点: 试题来源: 解析 做反转录需要用到的试剂: 反转录酶 反转录酶buffer RNA酶抑制剂 dNTP 反转录引物(oligo(DT)) PCR用到的试剂 dNTP Taq酶 Taq酶buffer 上下游引物 反转录cDNA模板反馈 收藏 ...
总RNA提取可以:(1)获得高纯度、高质量的总RNA;(2)可以满足生物学下游实验Northern Blot、核酸酶保护实验、RT-PCR、qRT-PCR和阵列分析所需。 二、cDNA第一链的合成 目前试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售,其原理基本相同,但操作步骤不一。现以GIBICOL公司提供的SuperScriptTM Preamplification System for First S...
RT-PCR提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的信使RNA弄出来,更重要的是,RNA太容易分解了,环境中无处不在的RNA酶,以及其容易被水解的特点啊,我们不得不尽快把珍贵的信使RNA转化成稳定的形式,于是就有...
用其1/25～1/10即可。（五）RNA酶污染 避免RNA酶污染是RT—PCR成功的关键之一。用于RNA操作的各种器皿，包括Eppen—dorf管、Tip头等，都应该用RNA酶抑制剂处理，试剂应该用RNase—free水配制。使用的全部器皿和耐高压的试剂都必须经高压灭菌处理。在操作全过程中，操作者都应该戴一次性手套和口罩，以防污染。
缺点:需要根据不同的序列,合成不同的探针;探针的水解依赖Taq酶外切酶的活性,定量时容易受试剂和酶性能影响;淬灭难以彻底,成本较高;检测结果很难判断实际的扩增特性。 RT-PCR流程: 反转录PCR(Reverse Transcription - PCR,RT-PCR),是PCR的一种广泛应用的变形。RT-PCR 结合了反转录(Reverse Transcription)和聚合酶链...
3．PCR：（1）取0.5ml PCR管，依次加入下列试剂：第一链cDNA 2μl 上游引物（10pM） 2μl 下游引物（10pM） 2μl dNTP(2mM) 4μl 10×PCR buffer 5μl Taq 酶（2u/μl） 1μl （2） 加入适量的ddH2O，使总体积达50μl。轻轻混匀，离心。（3） 设定PCR程序。在适当的温度参数下扩增28-32个...
学习和掌握逆转录、RT-PCR基因扩增技术和操作方法,并深刻理解逆转录、RT-PCR基因扩增技术在功能基因克隆与载体构建过程中的重要性。 二、RT-PCR实验试剂和材料 大肠杆菌DH5a、Trizol试剂、逆转录试剂、PCR相关试剂、PCR产物克隆试剂、氯仿、异丙醇、DEPC水等。
1、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）2、cDNA文库构建 3、RNA测序 4、RT-qPCR，2019新冠核酸检测所配置的体系试剂当中，必然会加入逆转录酶。因为RNA病毒必须逆转录为DNA，才能进行PCR反应。M-MLV逆转录酶 DNA聚合酶 定义：它是以DNA为模板，从DNA5'端复制到3'端，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一类酶。主要...