实时荧光定量RT-PCR技术需要在常规PCR基础上添加荧光染料或荧光探针,荧光染料能特异性掺入DNA双链中,从而发出荧光信号。在新冠病毒肺炎疫情期间,可以通过实时荧光定量RT-PCR技术进行核酸检测。下列相关叙述正确的是( ) A. 图中的探针可能是利用荧光分子标记的新冠病毒独特的基因序列 B. 核酸检测是通过检测荧光信号来确...
解析 引物是用来扩增片段用的,而探针,探针上面有荧光基团,完整时检测不到荧光,与两引物之间的目的基因结合,PCR扩增过程中,探针被切断,可以检测到荧光.扩增得到的目的基因越多,那么探针被切断的也越多,检测到的荧光也越多,所以常用来做定量PCR.结果一 题目 RT-PCR 的 探针 和 引物 是什么 它们的作用是什么啊?
当探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，以至于无法检测到荧光信号；而当PCR扩增时（在延伸阶段），探针会被Taq酶的5'→3'外切酶活性酶切降解，使报告基团和淬灭基团分离，报告基团发射底的荧光不会再被吸收，从而可以在荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一条DNA，就形成一个荧光分子，PCR产物的形成...
rt-pcr探针原理 RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)探针原理是一种基于实时荧光检测的核酸扩增技术,用于定量分析目标RNA分子。其原理如下: 1.首先,从目标组织或细胞中提取总RNA,然后通过逆转录酶将RNA转化为cDNA。 2.采用特定引物和探针进行PCR扩增。探针是一种荧光标记的DNA分子,能够与目标cDNA序列特异性地结合。 3....
(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)可以:(1)分析基因的转录产物;(2)获取目的基因;(3)合成cDNA探针;(4)构建RNA高效转录系统。 实验方法原理 逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT...
常采用RT-PCR技术(逆转录荧光PCR技术)检测多种病毒感染。该技术的原理是:在PCR反应体系中加入引物的同时,加入与某条模板链互补的荧光探针,当DNA聚合酶催化子链延伸至探针处时会水解探针,使荧光监测系统记录到荧光信号,即每个荧光探针被水解就有一个荧光信号生成并被准确记录(如图)。 (1)PCR反应体系中需要添加模板...
RT-PCR探针是一种特殊的引物,用于在RT-PCR反应中选择性地扩增目标基因的特定序列。与PCR引物不同,探针通常带有额外的物质,如荧光染料或报告分子,以便在扩增过程中检测目标序列的存在与否。 1.探针的设计 探针的设计是RT-PCR技术中极其重要的一步。为了保证高度特异性和敏感性,需要根据目标基因的序列设计探针。 首先...
实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过在PCR反应体系中加入荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,与DNA产物特异性结合,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,最终通过...
RT-qPCR反应时,寡核苷酸两个基团分离,即可检测到荧光信号,并与PCR产物同步。 使用这种方法的荧光检测依赖于两个过程:1)引物与目标序列的结合(2)探针与引物下游 互补序列的结合。 优点: 1、更有可能只放大所需的产物,由于引物和探针的结合具有特异性。 2、不需要解离曲线,只有探针与正确的目的序列结合时才能检测...