高灵敏度:RT-PCR能够检测非常低浓度的RNA分子,甚至能够检测到单个细胞中的RNA表达。这使得它成为研究基因表达、疾病标志物检测等领域的重要工具。 高特异性:通过设计特异性引物,RT-PCR可以精确地扩增目标RNA序列,从而避免非特异性扩增的干扰。这种特异性使得RT-PCR在复杂生物样本中能够准确识别并扩增目标基因。 定量能...
1.方便性:集成了所有必要的反应成分,减少了试剂准备的时间和复杂性. 2.高效性:优化了反应条件,提高了反转录和pcr扩增的效率. 3.准确性:减少了因手动操作引起的误差,提高了实验结果的准确性. rt-pcr mix广泛应用于分子生物学领域,包括基因表达分析,疾病诊断,病原体检测,药物研发等.例如,...
RT-PCR的第一步是合成DNA/RNA杂交体。逆转录酶也有RNA酶H功能，降解杂交体的RNA部分。然后，单链DNA分子通过逆转录酶的依赖于DNA的DNA聚合酶活性完成cDNA。第一链反应的效率会影响扩增过程。从这里开始，使用标准的PCR程序来扩增cDNA。通过RT-PCR将RNA还原成cDNA的可能性有许多优点。RNA是单链的，非常不稳定，这...
RT-PCR检测是一种非常强大的技术,它以其高灵敏度、高特异性、高可靠性和快速性等优点,为科学家们提供了一种强大的工具,使得他们能够更加精确地研究基因的表达和调控。然而,任何技术都有其局限性,该实验服务也不例外。例如,它不能直接检测RNA,需要先将其逆转录成cDNA;它也不能直接检测蛋白质,需要通过蛋白质印迹...
荧光探针法的优点:具有强大的特异性检测能力;高灵敏度;非常适合于进行多重qPCR检测;在PCR之后无需进行任何处理,从而节省时间和原料成本。 荧光探针法的缺点:需要根据不同的序列,合成不同的探针;探针的水解依赖Taq酶外切酶的活性,定量时容易受试剂和酶性能的影响;淬灭难以彻底,本底较高;检测结果很难判断实际的扩增特性...
优点:检测特异性强;灵敏度高;适合进行多重qPCR检测;PCR后续无需处理,节省时间和原料成本。 缺点:需要根据不同的序列,合成不同的探针;探针的水解依赖Taq酶外切酶的活性,定量时容易受试剂和酶性能影响;淬灭难以彻底,本底较高;检测结果很难判断实际的扩增特性。
1、优点 1)RT过程 ①使用Oligo dT和Random Primer最适比例混合液作为引物,对RNA模板的要求宽泛,如大多数RT Enzymes对1ng-1μg起始模板量总RNA都可高效率逆转录。 ②两步RT-PCR可将大批量的RNA转化为cDNA,然后储存cDNA用于后续实验,不仅可检测大量基因,而且得到的cDNA还可用于文库构建或基因克隆等,应用更广泛。
优点：检测特异性强；灵敏度高；适合进行多重qPCR检测；PCR后续无需处理，节省时间和原料成本。缺点：需要根据不同的序列，合成不同的探针；探针的水解依赖Taq酶外切酶的活性，定量时容易受试剂和酶性能影响；淬灭难以彻底，本底较高；检测结果很难判断实际的扩增特性。图3 荧光染料法和荧光探针法的工作原理（Cao et ...
尽管具有主要优点,但 RT-PCR 并非没有缺点。由于难以保持线性,反转录互补 DNA (cDNA) 在多个 PCR 循环期间呈指数增长,导致终点定量不准确。为了准确检测和定量样品中的 RNA 含量,使用基于荧光的修改开发了 qRT-PCR,以监测每个 PCR 循环期间的扩增产物。该技术的极端敏感性可能是一把双刃剑,因为即使是最轻微的 DN...