首先,该技术具有极高的灵敏度,能够精确捕捉到极低浓度的RNA分子,甚至实现单细胞RNA表达的检测,为基因表达和疾病标志物研究提供了强有力支持。其次,RT-PCR通过特异性引物设计,确保了扩增过程的高度特异性,有效避免了非目标序列的干扰,在复杂样本中也能准确锁定目标基因。再者,结合实时荧光定量PCR技术,RT-PCR还能对RNA...
高灵敏度:RT-PCR能够检测非常低浓度的RNA分子,甚至能够检测到单个细胞中的RNA表达。这使得它成为研究基因表达、疾病标志物检测等领域的重要工具。 高特异性:通过设计特异性引物,RT-PCR可以精确地扩增目标RNA序列,从而避免非特异性扩增的干扰。这种特异性使得RT-PCR在复杂生物样本中能够准确识别并扩增目标基因。 定量能...
PCR、qPCR、RT-PCR和RT-qPCR这四种技术的主要区别在于它们的应用领域和检测目标不同。PCR主要用于DNA序列的扩增和检测;qPCR可以实时定量检测DNA或cDNA的含量;RT-PCR主要用于RNA分子的扩增和检测;而RT-qPCR则结合了RT-PCR和qPCR的技术,可以对RNA分子进行定量分析。 (四)总结 1.PCR,通常指的是普通PCR,以双链DNA为...
优点：1.中间产物 cDNA 能够建立可以长期保存，并用于多次反应的稳定的cDNA库;2. 通过oligo dT和随机引物，可以从单个RNA样本中扩增多个靶标，而不需要多重cDNA库;3. 方便对下游条件优化调整，灵活性强;4. 试验成本低。缺点：1. 更多的移液步骤会增加DNA污染的风险，并且耗时;2. 相较于一步法，需要进行更多的...
RT-PCR Mix具有以下优点: 1.方便性:集成了所有必要的反应成分,减少了试剂准备的时间和复杂性。 2.高效性:优化了反应条件,提高了反转录和PCR扩增的效率。 3.准确性:减少了因手动操作引起的误差,提高了实验结果的准确性。 RT-PCR Mix广泛应用于分子生物学领域,包括基因表达分析、疾病诊断、...
RT-PCR检测是一种非常强大的技术,它以其高灵敏度、高特异性、高可靠性和快速性等优点,为科学家们提供了一种强大的工具,使得他们能够更加精确地研究基因的表达和调控。然而,任何技术都有其局限性,该实验服务也不例外。例如,它不能直接检测RNA,需要先将其逆转录成cDNA;它也不能直接检测蛋白质,需要通过蛋白质印迹...
优点：检测特异性强；灵敏度高；适合进行多重qPCR检测；PCR后续无需处理，节省时间和原料成本。缺点：需要根据不同的序列，合成不同的探针；探针的水解依赖Taq酶外切酶的活性，定量时容易受试剂和酶性能影响；淬灭难以彻底，本底较高；检测结果很难判断实际的扩增特性。图3 荧光染料法和荧光探针法的工作原理（Cao et ...
荧光探针法的优点:具有强大的特异性检测能力;高灵敏度;非常适合于进行多重qPCR检测;在PCR之后无需进行任何处理,从而节省时间和原料成本。 荧光探针法的缺点:需要根据不同的序列,合成不同的探针;探针的水解依赖Taq酶外切酶的活性,定量时容易受试剂和酶性能的影响;淬灭难以彻底,本底较高;检测结果很难判断实际的扩增特性...
而一步法RT-PCR 具有其它优点(表2), cDNA 合成和扩增反应在同一管中进行, 不需要打开管盖和转移, 有助于减少污染。还可以得到更高的灵敏度, 最低可以达到0.1pg 总RNA,因为整个cDNA样品都被扩增。对于成功的一步法RT-PCR, 一般使用基因特异性引物(GSP)起始 cDNA 的合成。