1. Total RNA was extracted using a Trizol reagent (Invitrogen). RNA (2 μg) was converted into cDNA using the RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit (Thermo). QRT-PCR was accomplished using the FastStart Universal SYBR Green Master (Rox) (Roche) in the ABI PRISM® 7300 real-time PCR...
步骤 1.提取RNA:RT-PCR的第一步是从样品中提取RNA。常见的方法包括酚/氯仿提取法和商用RNA提取试剂盒。 2.逆转录:逆转录是将RNA转录成cDNA的过程。逆转录反应需要逆转录酶和引物。在逆转录反应中,RNA被逆转录酶逆转录为单链cDNA。 3.退火:将逆转录产生的单链cDNA进行退火,以得到双链cDNA。退火的温度和时间应...
下面是RT-PCR的具体步骤: 1.提取RNA:首先从样本(可以是细胞或组织)中提取RNA。这可以通过商业RNA提取试剂盒或经典的酚-氯仿提取法来完成。提取的RNA可能含有DNA杂质,因此可以使用DNA酶I来去除DNA。 2.逆转录反应:将提取的RNA转录成互补的DNA(cDNA)的过程称为逆转录。逆转录反应的目的是将RNA转录成cDNA,并将其...
1【题文】目前采用RT-PCR技术(逆转录荧光PCR技术)进行新冠毒核酸检测,操作流程:从密接者组织中提取RNA→将RNA逆转录为cDNA→PCR扩增cDNA→DNA分子杂交进行核酸检测→通过荧光强度判断是否含有病毒核酸。“核酸检测试剂盒实际上是盛放有几种关键试剂的盒子,比如:特异性的荧光DNA探针(特异性的带荧光的病毒核酸序列)逆转...
1从供体生物特定分化型组织或细胞中提取纯化总RNA,其中目的mRNA为高丰度mRNA;2以Oligo(dT)为引物,以总RNA中的总mRNA为模板,在反转录酶作用下合成互补的总cDNA;3变性:升温至94~95°C加热5min,使总mRNA : cDNA的杂交链由于热变性而分开成单链;4退火:降温至40~60°C,加入“上游”寡核苷酸引物和“下游”寡核苷...
实验步骤 一、总RNA的提取 总RNA提取可以:(1)获得高纯度、高质量的总RNA;(2)可以满足生物学下游实验Northern Blot、核酸酶保护实验、RT-PCR、qRT-PCR和阵列分析所需。 二、cDNA第一链的合成 目前试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售,其原理基本相同,但操作步骤不一。现以GIBICOL公司提供的SuperScriptTM Preampli...
在本文中,我们将介绍RT-PCR的具体步骤,以便您更加全面地了解这种技术。 1.总RNA提取 首先需要从细胞中提取RNA。这可以通过商用试剂盒或手工方法实现。如果使用试剂盒,则遵循其说明书中的步骤。如果手工提取RNA,则需要使用三个基本试剂:细胞裂解缓冲液、氯仿和异丙醇。步骤如下: •将细胞收集在管中,加入裂解缓冲...