【题目】目前采用RT-PCR技术(逆转录荧光PC R技术)进行新冠毒核酸检测,操作流程:从密接者组织中提取RNA→将RNA逆转录为cDNA→PCR扩增cDNA→DNA分子杂交进行核酸检测→通过荧光强度判断是否含有病毒核酸。“核酸检测试剂盒实际上是盛放有几种关键试剂的盒子,比如:特异性的荧光DNA探针(特异性的带荧光的病毒核酸序列)逆...
新冠病毒是一种单链RNA病毒,常用“荧光RT-PCR技术”进行检测,方法是取检测者的mRNA在试剂盒中逆转录出cDNA,并大量扩增,同时利用盒中荧光标记的新冠病毒核酸探针来检测PCR产物中是否含有新冠病毒的cDNA,在检测过程中,随着PCR的进行,反应产物不断累积,“杂交双链”荧光信号的强度也等比例增加。 (1)“荧光RT-PCR技术...
RT-PCR 技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平、表达差异,细胞中RNA 病毒的含量和直接克隆特定基因的 cDNA序列(complement DNA)。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术更灵敏,更易于操作。 逆转录RT-PCR提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,...
🔍 RT-PCR,顾名思义,是逆转录PCR的简称。它巧妙地将RNA的逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应(PCR)结合在一起。这种技术不仅灵敏,而且应用广泛,可以检测细胞/组织中的基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量,甚至直接克隆特定基因的cDNA序列。📚 它的工作原理是这样的:首先,从组织或细胞中提取总RNA,然后以其中...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合,其中的“RT”是Reverse transcription(逆转录)的意思,所以RT-qPCR就是结合了荧光定量技术的逆转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR只可以定性,但不能进行定量分析。与RT-PCR一样,RT-qPCR定量分析...
新型冠状病毒的检测主要包含核酸检测、抗体检测、抗原检测等几种方法。其中利用实时荧光RT-PCR技术检测新型冠状病毒特异性核酸序列是最常用的方法。RT-PCR是将逆转录(RT)、PCR以及荧光标记等相结合的技术。如图1为数字PCR技术的原理示意图。荧光的出现是荧光探针水解导致的,荧光探针将首先与模板DNA的相应区段结合(靶分...
目前针对新冠病毒的检测方法主要有核酸检测、抗原检测、抗体检测三大类。目前常用“荧光RT-PCR技术”进行核酸检测,方法是取被检测者的mRNA在试剂盒中逆转录出cDNA,并大量扩增,同时利用盒中荧光标记的新冠病毒核酸探针来检测PCR产物中是否含有新冠病毒的cDNA,在检测过程中,随着PCR的进行,反应产物不断累积,“杂交双链”荧...
一、RT-PCR操作步骤 RNA抽提 方法：TRlzol法。主要成分：苯酚（具有裂解细胞和变性蛋白的作用）。RNA抽提...