先将1-10μl左右PCR产物,加已点在纸上的溴酸兰,反复吸打混匀后进行电泳,一般电流为10mA,电源100V,电泳30分钟,紫外灯下观察,满意的结果扫描打印。 九、几个注意点: 1、逆转录的关键步骤是立即冰水浴? 2、Rt时,先打开PCR预热30分钟。 3、RNA抽提前,打开离心机预冷。 TRIzol法抽提总RNA 细胞1×107 组织100...
所需仪器与耗材有: LightCycler® 480 全自动实时定量 PCR 仪以及配 套使用的 96 或 384 多孔板,透明封板膜等一次性耗材。朗基T30 PCR 仪、rainin单道移液器、Nunc 冰盒及NEST 盒装吸头等。 实验操作流程: 1.用新鲜提取的 RNA 反转 录合成 cDNA 第一链,然后进行实时荧光定量 PCR,其中包括:SYBR Green 反...
RT-1000 实时荧光定量PCR系统 RT-1000仪器由三部分组成:一温度控制系统,由标准的96加热/冷却系统和热盖组成。二由光学元件组成的光路系统,包括激发光源,光学过滤器,透镜和检测系统。三上位机软件,用于编程,实时检测,显示和数据管理等。产品如图1所示。 1)温度控制系统温度控制系统是由加热模块和温度控制单元组成。
首先，RT不是证明RNA有无表达的很好方法，RT批不出来会有很多原因，并不仅仅是没有模板。建议你做northern。做RT需要 1，很干净整洁的实验环境，RNA提取对操作环境的要求很高。2，电动组织分散仪（IKA公司的T10那种）或研钵+液氮或玻璃组织研磨器，以上提取效果递减。3，1.5ml管冷冻离心机。4，移液枪...
逆转录PCR实验材料和实验步骤 1.材料: RNA样品。 2.仪器、用具: PCR仪、电泳仪等、0.2mlPCR管(1个)、移液器、碎冰。 3.试剂: RNase Free dH2O;5×RT Buffer(含25mM Mg2);dNTP(10mM each);RNase Inhibitor(10U/μl);Oligo(dT)20(10μmol/L);ReverTra Ace。
02 仪器与设备 材料:提取RNA样品,如新鲜组织、培养细胞。 试剂:RNA提取试剂,(见文章:试验教程 | RNA提取)、DEPC处理水、Money鼠白血病病毒(MMLV)反转录酶、5×反转录缓冲液、oligo(dT)12~18、第一链cDNA合成试剂盒、dNTP混合物(含等量dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、Taq DNA聚合酶、10×PCR缓冲液、冰块、双蒸水(...
Thermo 的PIKOreal 性价比挺高的，应该是性价比最高的进口实时荧光定量PCR仪，ABI、BIO-RAD.ROCH.是...
四、需用户自己准备的试剂耗材和仪器: 1. 引物、探针(可选) 推荐MB公司提供的引物/探针(英文名:SARS-CoV-2 Confirm, 货号271-2100) 2. 荧光定量PCR仪(qPCR仪) 3. 无DNase和RNase的qPCR反应管 4. 离心机 5. 移液器及带滤芯吸头(不含DNase和RNase) ...
本实验室用的是 Applied Biosystems 的仪器,参考试剂盒中 Applied Biosystems 7500 and 7500 Fast Real-Time PCR System 和 StepOnePlus Real-TimePCR Systems 的操作方法。 使用StepOnePlus Real-Time PCR System 时,ROX Reference Dye (50X)添加量为 PCR 反应体系的 1/50。考虑到吸取误差,配置的预混液体积要至...