为了在SuperScriptⅡ逆转录反应中最大限度提高RT-PCR的灵敏度,可以加入10%的甘油并在45℃保温。如果1/10的逆转录反应产物加入到PCR中,那甘油在扩增反应中的浓度为0.4%,这不足以抑制PCR。 5. RNaseH处理: 在PCR之前使用RNaseH处理cDNA合成反应可以提高灵敏度...
RT-PCR提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的信使RNA弄出来,更重要的是,RNA太容易分解了,环境中无处不在的RNA酶,以及其容易被水解的特点啊,我们不得不尽快把珍贵的信使RNA转化成稳定的形式,于是就有...
RT-PCR实验阴性对照 反转录阴性对照应包括在所有的RT-PCR的实验中,用来检测DNA是否污染(如基因组DNA或PCR产物)。该对照所指不加反转录酶,通过反转录过程得到cDNA在进行荧光定量PCR检测。如检测到扩增,则样本中可能含有基因组DNA污染。 END Super Lab。订阅号若有侵权或...
RT-PCR提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的信使RNA弄出来,更重要的是,RNA太容易分解了,环境中无处不在的RNA酶,以及其容易被水解的特点啊,我们不得不尽快把珍贵的信使RNA转化成稳定的形式,于是就有...
PCR产物纯化回收试剂盒 质粒提取/胶回收相关 本试剂盒基于硅基质材料与DNA结合的特性,采用独特的结合液系统纯化并回收PCR产物,同时通过WB除去蛋白质、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。 view all 产品中心 1kb DNA L adder 核酸电泳 本产品为预混有 1x上样缓冲液的即用型 DNA分子量标准,由 8条线状双链 DNA条...
(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)可以:(1)分析基因的转录产物;(2)获取目的基因;(3)合成cDNA探针;(4)构建RNA高效转录系统。 实验方法原理 逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT...
cDNA 的合成首先在逆转录缓冲液中进行,然后取出1/10的反应产物进行 PCR。 而一步法RT-PCR 具有其它优点(表2), cDNA 合成和扩增反应在同一管中进行, 不需要打开管盖和转移, 有助于减少污染。还可以得到更高的灵敏度, 最低可以达到0.1pg 总RNA,因为整个cDNA样品都被扩增。对于成功的一步法RT-PCR, 一般使用...
NIRO科研喵:实验技能 | 第二期:常见核酸(RNA)提取和纯化的方法 5. 逆转录实验步骤 目前市面上常见的逆转录试剂盒有cDNA链第一合成试剂盒(去基因组和反转录是分开的)、cDNA链第一合一管化试剂盒(一管化,将去基因组和反转录预混在一起)以及一步法RT-PCR试剂盒。不过,小编在这里常用的试剂盒是GenStar StarSc...
(PCR的基本原理,来源:维基百科) 那在扩增完成之后我们需要对扩增出来的DNA进行检测,常规的PCR技术通常只能借助凝胶电泳手段,其是根据DNA的分子量大小不同对DNA进行分离,从而进行鉴定以及纯化DNA的技术。 优点:经典方法,国际和国内标准齐全,仪器试剂成本较低,PCR产物可以回收后做其他分子生物学实验 ...
以防止污染。UDG酶 HL-UDG酶 RNase抑制剂 定义：该酶是在大肠杆菌中表达纯化的重组鼠源RNase抑制剂，可通过非竞争方式1:1与RNase A、B或C结合，从而抑制三种酶的活性。作用：保护RNA不被降解。在IVD领域中应用：在RT-PCR、RT-qPCR检验中，能与各类商业化逆转录酶及各种DNA Polymerase兼容。RNase抑制剂 ...