本发明属于农业生物技术领域,具体涉及RPL19基因作为广聚萤叶甲内参基因的应用。本发明筛选了12个广聚萤叶甲候选内参基因,获得候选内参基因的基因序列,设计简并引物,克隆得到广聚萤叶甲中上述候选基因的部分核苷酸序列,并基于该序列设计特异性定量引物,利用SYBR GreenI染料技术的RT‑qPCR方法,筛选出了广聚萤叶甲不同发育时期及
(2)以cDNA为模板,利用表1扩增引物,PCR扩增广聚萤叶甲RPL19内参基因的核苷酸序列片段; (3)琼脂凝胶电泳检测(2)中扩增结果,切胶回收目的片段纯化,纯化产物与pEASY-T3载体连接,转化至大肠杆菌感受态细胞Transl-T1,37°CLB平板培养过夜,蓝白斑筛选含RPL19片段的阳性克隆子; (4)将(3)所获得的阳性克隆子送生物公司测序...