1.恒温扩增-Nfo探针结构：恒温扩增-Nfo探针通常含有核苷酸类似物THF(四氢呋喃)、5’端荧光基团（FAM、FITC等）、3’端Block（合适的3’-修饰基团(例如C3-spacer,aphosphate, a Biotin-TEG or an amine）组成。THF(四氢呋喃)替代了目标序列中的碱基，而不是附加插入序列中。2.恒温扩增-Nfo反向
RPA技术原理及引物探针设计简介 英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，最佳反应温度...
另外,在RPA体系中加入荧光探针和核酸酶,便可进行实时检测;若结合侧向层析技术,则可实现可视化检测。根据荧光探针设计上的差异及对应核酸酶的不同,RPA探针一般分为Exo探针、Fpg探针和LF探针,其各自的检测原理如图2所示:①Exo探针配合核酸外切酶(exonuclease, e...
反向引物的浓度为5μmol/l,所述的探针的浓度为10μmol/l、镁离子浓度280μmol/l,模板加样量为1μl;将2.1μl正向引物、2.1μl反向引物、0.6μl探针、1μl样品、12.2μl无dnase和rnase水和29.5μl缓冲液组成预混液,加到含有冻干酶粉的0.2ml的twistamp nfo反应管中,然后将2.5μl的醋酸镁溶液...
无法满足快速高通量和准确有效的快速应急分析需求,本发明首先建立了对应抗生素耐药基因的重组酶聚合酶扩增技术平台,建立了blandm、blakpc、mcr、tetlr抗生素耐药基因的检测方法,blandm采用exo-rpa常温检测扩增,其余基因采用nfo-rpa常温扩增进行检测,分别设计上下游引物及exo和nfo探针,并设计了一种用于检测抗生素耐药基因的rpa...
1.一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的引物组和探针,其特征在于:包括引物组和探针Probe;所述引物组包括正向引物RPA-F和反向引物RPA-R;正向引物RPA-F序列:5’-ATTCTRATGATAAATGGCACTCCACTTCCGGC-3’;反向引物RPA-R序列:5’-CCTACTCGTCAAACGTTTGTTCTGGCCCTAGCTT-3’;探针Probe的核苷酸序列由两部分连接而成,...
本发明以曼氏血吸虫COX1 (SmCOX1)基因为靶序列设计了RPA引物及探针, 并采用RPA扩增技术结合侧流层析引流试纸条 法,实现了曼氏血吸虫核酸的敏感、快速可视化 检测,对曼氏血吸虫基因组DNA检测限可达10fg, 可检出曼氏血吸虫感染早期小鼠血清及粪便中 的曼氏血吸虫SmCOX1靶核酸片段,操作简单且快 捷,无需特殊仪器,反应...
本发明公开了表皮葡萄球菌RPA‑LFS检测引物探针组合及其应用,本发明首先以SesB基因为分子诊断的靶点设计了5对引物,并根据其扩增性能及引物二聚体的形成情况进行了筛选;然后根据筛选出的最佳引物对设计了特异性的探针,当使用LFS进行检测时容易受到引物依赖伪影的影响,产生假阳性信号;通过对引物和探针的序列修改克服了LFS...
摘要:本发明公开了一种RPA‑Cas12a检测系统及其在肝胰腺坏死病检测中的应用,该系统包括Cas12a预混液和用于扩增RPA产物引物和试剂,Cas12a预混液包括ssDNA、Cas12a和crRNA;ssDNA为两端分别修饰有荧光基团FAM和猝灭基团BHQ1的单链DNA;crRNA为能引导Cas12a靶向识别AHPND RPA产物的向导RNA序列。本发明将RPA高扩增性能与CR...