快速、灵敏的核酸检测方法是核酸检测的关键,基于RNA引导的CRISPR/Cas12a核酸酶的方法在核酸检测方面展现出很大的前景,然而在目前的方法中,DNA扩增和随后的Cas12a切割是分开的,并且整个反应过程长达两个小时,最重要的是,中途的开盖操作可能会增加气溶胶污染的风险。 近期复旦大学王永明团队[1]研究发现一种名为“Cas12a...
超高灵敏CRISPR-Cas12a分子诊断传感器构建用于非洲猪瘟病毒感染快速筛查 本研究开发了一种结合RPA、CRISPR/Cas12a和磁珠-酶新型报告系统,用于ASFV基因的快速精准诊断的方法。如图1所示,biotin-ssDNA-azide与DBCO修饰的碱性磷酸酶(ALP)通过点击化学反应合成biotin-ssDNA-ALP,biotin-ssDNA-ALP与链霉亲和素修饰的磁珠(SA-MB)...
在检测阶段,gRNA-CRISPR/Cas12a复合物通过PAM位点识别目标序列(图1,步骤3),成功激活效应分子Cas12a。然后,被激活的Cas12a蛋白切割目标序列,同时在反应体系中实现探针(用荧光团标记的ssDNA)的非特异性反式切割(图1,步骤4至6)。最后,荧光信号被释放出来,可以作为检测结果的指标被收集。RPA-CRISPR/Cas12a检测的整个...
即使在样本中含有PCR抑制剂的情况下,RPA-CRISPR/Cas12a技术依然能够准确检测出大肠杆菌O157:H7的存在,而qPCR则因抑制剂的影响而无法检测到高浓度的目标细菌。 图2. RPA - CRISPR/Cas12a系统的评估。(A) RPA - CRISPR/Cas12a的特异性;泳道1 - 4:大肠杆菌O157:H7(美国典型培养物保藏中心编号43895、43889、35150...
在该文章中,作者采用All-In-One Dual CRISPR-Cas12a(termed "AIOD-CRISPR")装置来实现快速,超灵敏和有效的可视化核酸检测。该方法与PCR不同,如下图所示,反应是在37°C等温的情况下进行。然而与其他等温扩增技术不同的是,该方法具有更好的灵敏度和特异性,速度也会快很多。 AIOD-CRISPR方法的工作原理图如下所示...
设计靶向三个RPA扩增子序列的crRNA,利用琼脂糖凝胶电泳验证了Cas12a被激活并切割RPA扩增子。最后,结合合成的MB-ssDNA-ALP探针、RPA-CRISPR/Cas12a系统以及蓝色CdZnSe QDs,实现了对ASFV基因的比色-荧光双模式精准检测,灵敏度达20 copies/mL,可视化检测104 copies/mL(图 2A-2D)。
在ESCMID Global 2025大会上,印度基督教医学院科学家Jobin Jacob John团队开发的“RPA-CRISPR / Cas12a联用技术检测伤寒及副伤寒A”研究入选壁报交流。该技术突破传统诊断方法的灵敏度限制,可在30分钟内直接检测血液样本中的病原体,为伤寒...
为解决向日葵茎溃疡病菌(Diaporthe helianthi)检测难题,研究人员开发 RPA/CRISPR-Cas12a 检测体系,灵敏度高且适用于现场检测。 向日葵,作为世界主要油料作物之一,不仅在食用油生产方面占据重要地位,还广泛应用于医药、化妆品领域,甚至非油用向日葵还具有观赏价值,其种子也是深受欢迎的零食以及鸟类和小宠物的食物。然而,一...
1.一种基于RPA‑CRISPR/Cas12a大肠杆菌检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括: RPA扩增预混液和CRISPR/Cas12a预混液,其中RPA扩增预混液包括用于扩增RPA产物的正向 引物RPA‑F和反向引物RPA‑R,其中CRISPR/Cas12a预混液包括ssDNA、Cas12a和CrRNA,所述 ...
本发明属于生物领域,公开了一种检测副猪嗜血杆菌的RPA‑CRISPR/Cas12a引物组、gRNA和探针,包括RPA引物组、gRNA和探针;所述RPA引物组包括如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所述的上游引物和下游引物;gRNA的序列如SEQIDNO.3所示;所述探针的序列如SEQIDNO.4所示;所述探针的5端和3端分别为荧光基团和淬灭基团。其具有检出...