RPA原理是利用一种特殊的酶体系,在等温条件下,特异性地扩增目标DNA序列。该酶体系由一个主要的酶(聚合酶)和多个辅助酶组成,可以在温度为37-42℃的条件下进行。 RPA扩增的原理与PCR类似,都是使用一对引物将目标序列扩增成数以百万计的复制品。但是,RPA使用的酶体系不同于PCR,主要包括一种重组蛋白(recombinase)、...
RPA技术的扩增原理基于重组酶、单链DNA结合蛋白和聚合酶三个关键酶的协同作用。在反应开始时,RPA酶不需要热能,即可在双链DNA的萎缩端发生结合,形成核酸蛋白复合物,这是RPA技术扩增的第一步。接着,DNA结合蛋白和重组酶在单链DNA的离子环境下协同作用,推动单链DNA进行局部解旋。聚合酶则利用解旋后的单链DNA作为模板...
原理:这是一种基于酶促反应的 DNA 体外等温扩增技术,主要利用限制性内切酶剪切 DNA 识别位点的能力和 DNA 聚合酶在切口处向 3'延伸并置换下游序列的能力,在等温条件下进行扩增。整个过程由准备单链 DNA 模板、生成两端带酶切位点的目的 DNA 片段、SDA 循环扩增 3 个步骤组成。 SDA链置换扩增原理示意图(图源:Re...
通过RPA-LFS技术,等温扩增lytA基因,可在35 min内快速、灵敏并特异地检测出阳性菌,并且检测结果较PCR检测方法更为准确,最低检测限(limit of detection,LOD)仅为3.32 CFU[11,27],与其他高灵敏度检测方法LOD相似。 流感嗜血杆菌根据荚...
RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。 RPA重组酶聚合酶扩增原理示意图 3、RCA滚环扩增技术 原理:以环状 DNA 为模板,通过一个短的 DNA 引物(与部分环状模板互补),在 phi29 DNA...
RPA的目标是在等温条件下扩增特定的核酸序列。其主要原理基于两个关键组分:寡核苷酸引物和核酸酶。引物包括一个引导引物(primer)和两个酶拆分引物(probe),它们都与目标序列互补。在反应开始时,引物与DNA模板的目标序列结合形成引物-模板复合物。外源的核酸酶通过切割酶拆分引物的作用将其离解,并释放出一个能够启动下...
LAMP 环介导等温扩增原理示意图 RPA重组酶聚合酶扩增技术 原理:重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合...