研究基于磁珠及RNAse H酶切，得到酶解后、带或不带帽结构的5’端寡核苷酸片段，使用液相色谱质谱联用（LC-MS）检测，对带或不带帽结构的组分进行质谱峰面积定量，从而得到5’加帽比例。
核糖核酸酶H(RNA酶H)是一种位于细胞核与细胞质中的非特异性核糖核酸内切酶,。它普遍存在并广泛分布于病毒和人类等多种生物中。 应用 核糖核酸酶 H (RNase H) 已用于: 体内RNA 引发的 DNA 合成初始化 第二链 cDNA 合成过程中 mRNA 消除 RNA 的位点特异性切割 ...
RNase H(核糖核酸酶 H)是一种内切核糖核酸酶,特异性地水解 DNA/RNA 杂交链上的RNA的磷酸二酯键,但不会水解单链和双链 DNA 或RNA 中的磷酸二酯键。 产品组分 组分编号 组分名称 产品编号/规格 14522ES03 14522ES10 14522 RNase H (60 U/μL) ...
RNase H(核糖核酸酶H)是特异性分解RNA-DNA杂交体中的RNA链的核糖核酸内切酶,产生具有游离 3′-OH和 5′-磷酸末端的产物,该酶对单链的核酸,双链DNA或双链RNA不起作用。其反应原理如下: 此产品主要用作: 1. 通过Okayama-Berg法进行cDNA Cloning。
4. RNA特异位点的剪切。 单位定义 在50 μL的应体系中,37℃下反应20 min时,水解RNA-DNA杂交链生成1 nmol核糖核苷酸所需要的酶量定义为1 U。 质量控制 1.脱氧核糖核酸内切酶检测:RNase H孵育超螺旋质粒DNA,未见明显降解; 2.核糖核酸酶测定:RNase H孵育[3H]-RNA后未见明显降解; ...
RNase H有酶切位点吗？
一、基于RNase H的mRNA加帽率分析 体外转录(IVT)制备两种不同长度的mRNA(2.2 kb与9 kb)进行测试,其5’末端的前50个核苷酸序列相同,可使用同一种切割探针。使用两种加帽方法:牛痘加帽酶、ARCA(Cap 0)帽类似物。将制备得到的mRNA进行琼脂糖凝胶电泳,确认mRNA的长度和完整性。退火反应体系包括500 pmol RNase H探...
一、基于RNase H的mRNA加帽率分析 体外转录(IVT)制备两种不同长度的mRNA(2.2 kb与9 kb)进行测试,其5’末端的前50个核苷酸序列相同,可使用同一种切割探针。使用两种加帽方法:牛痘加帽酶、ARCA(Cap 0)帽类似物。将制备得到的mRNA进行琼脂糖凝胶电泳,确认mRNA的长度和完整性。退火反应体系包括500 pmol RNase H探...
研发人员在初步得到circRNA电泳结果的基础上,还可以结合Northern杂交,HPLC以及酶切手段进行进一步的确认。 RNase H特异性切割 RNase H可以在特定位点切割precursor RNA,使其一分为二,而将circRNA切割成线性RNA。一旦加入RNAase H,对于IVT反应产物来说,电泳图中会出现两条强度的切割后的条带,在分子排阻HPLC峰图上可以...