目前，基因干扰方面应用最广泛最成熟的还是短发卡RNA（shRNA）介导的RNAi技术。过去十几年，RNAi一直是基因功能研究尤其是功能基因组学筛选的首选方法。但是CRISPR技术的横空出世，凭借着更低的脱靶效率，更高的干扰水平，尤其是乘着今年诺贝尔化学奖的东风，势必会冲击RNAi的王座，成为审稿人和专家眼中的新宠儿。那么，...
最近比较基因靶向方法的研究表明,RNAi与CRISPR-Cas13相比,具有显著更多的脱靶效应。“Cas13似乎比RNAi更具特异性,可能成为降低RNA水平、调节蛋白质表达的首选工具,”Dr. O’Connell说道。CRISPR-Cas系统的一个关键方面是需要设计guide RNAs (gRNAs)和具有高靶向效率和低靶向命中潜力的靶点。“我们希望看到RNA靶向领域使...
“与其他一些分析相比,RNAi和转录组分析速度更快,成本更低,但结论不那么明确,所以这是这些技术的局限性,” Dr. Zhang指出。提高RNAi价值的一种策略是将其与其他方法的应用结合起来,作为基因表达研究的一部分。“蛋白质组学和RNAi应相互补充,并与代谢组学互补,”Dr. Zhang总结道。 CRISPR-Cas13争夺一个关键角色 ...
荷兰癌症研究所的René Bernards(他的实验室使用过CRISPR和RNAi)说,到目前为止,“我认为每个人都应注意RNAi的脱靶效应。它是这种技术的最大缺点。”导入的RNA分子不仅较低特异性地与脱靶转录本序列相互作用[3],而且它们也不可预测地干扰调节基因表达的细胞机制。 Bassik说,“这能够产生非常广泛的影响”,并且补充道,...
而来自荷兰癌症研究所的Roderick Beijersbergen教授是为数不多能够同时驾驭RNAi 与 CRISPR两种技术并能通过混合运用两种技术进行大规模筛选,效果达到一加一大于二的人之一。 Roderick Beijersbergen教授 Beijersbergen教授现任荷兰癌症研究所的高通量筛选研究组组长、NKI机器人和筛查中心主任。在过去几年间,他专注于功能性...
他们还考虑到了筛选后的样本制备,以便进行深度测序。研究人员建立了靶向人类和小鼠蛋白编码基因的新一代文库,并根据生物学功能将其分为12个亚文库。 研究表明,新一代RNAi文库在测试中的表现与CRISPRi旗鼓相当,能够获得高灵敏度和高特异性的互补性结果。
诺贝尔化学奖颁给它？一文看懂Crispr/Cas9技术的比较优势 2020 年诺贝尔化学奖重磅公布，这项大奖颁给了法国微生物学家Emmanuelle Charpentier和美国生物学家Jennifer Anne Doudna，以表彰她们开发了一种基因组编辑方法——Crispr/Cas9。在过去的十几年里，RNAi技术一直都是功能基因筛选的经典技术。但2012年Crispr/Cas9...
摘要: 在现代基因功能研究中,基于基因沉默与基因敲除原理的实验技术被广泛应用,其中应用最广泛的是RNAi和CRISPR.其中由于原理不同,实验技术的过程及效果也各有不同.在不同实验目的及实验条件下,两种实验技术各有优劣.本文总结了两者原理的不同,及实验技术的特点和优劣,以期对实验手段的选择有所帮助.关键词:...
利用CRISPR/Cas9系统特异性地切割Rbmy基因,研究其破坏Y染色体的可能性.我们针对Rbmy基因查找了6个靶位点,分别构建了相应的真核表达载体,原核表达载体及验证用靶载体.我们将Cas9,sgRNA及荧光报告靶载体共转染293T细胞系,通过检测细胞的荧光效率及荧光强度,比较CRISPR/Cas9系统在不同靶位点处的切割效率.本研究发现sgRNA...
近年来,成簇的规律间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/Cas9系统因其独特的基因编辑优势,为众多研究人员提供了研究的便利.CRISPR/Cas9系统可方便快捷地在体内外进行单基因或多基因编辑,从而在多种生物学研究中发挥作用.本文主要探讨CRISPR/Cas9系统的发展及其与RNAi的区别,...