Here we demonstrate that the class 2 type VI RNA-guided RNA-targeting CRISPR-Cas effector Cas13a (previously known as C2c2) can be engineered for mammalian cell RNA knockdown and binding. After initial screening
To achieve robust CRISPR/Cas13a-mediated RNA knockdown, Zhang Feng et al. first evaluated 15 CRIPSR Cas13a orthologues for protospacer flanking site (PFS) preference and activity using a previously described ampicillin-resistance assay (Fig. 1a). This assay monitors CRISPR Cas13a-mediated cleavage ...
[1] Cox DBT, Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Franklin B, Kellner MJ, Joung J, Zhang F. RNA editing with CRISPR-Cas13. Science. 2017 Nov 24;358(6366):1019-1027.[2] Kordyś M, Sen R, Warkocki Z. Applications of the versatile CRISPR-Cas13 RNA targeting system. Wiley Interdiscip Re...
相关研究结果于2017年10月4日在线发表在Nature期刊上,论文标题为“RNA targeting with CRISPR–Cas13”。 在这项新的研究中,来自MIT的张锋(Feng Zhang)教授和他的同事们证实切割RNA的Cas13a酶(之前称作C2c2)能够特异性地降低哺乳动物细胞中的内源性RNA和报告RNA水平。 这些研究人员已从多种细菌物种中寻找一种能够...
张锋的原文是:RNA targeting with CRISPR Cas13a,详情可以查阅原文。 文章摘要 我们(张锋团队)证明了2类VI型、由RNA引导的RNA靶向CRISPR-Cas蛋白的效应子CRISPRCas13a蛋白(以前称为C2c2)可以被设计用于哺乳动物细胞RNA敲低和结合。 在初步筛选15个直向同源物后,我们鉴定了来自Leptotrichia wadei(LwaCas13a)的Cas13a...
Applications of the versatile CRISPR-Cas13 RNA targeting system. Wiley Interdiscip Rev RNA. 2022 May;13(3):e1694. [2] Kellner MJ, Koob JG, Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Zhang F. SHERLOCK: nucleic acid detection with CRISPR nucleases. Nat Protoc. 2019 Oct;14(10):2986-3012. [3] ...
Cas13a结合和切割单链RNA。图片来自Stephen Dixon。 如今,在一项新的研究中,来自美国麻省理工学院(MIT)的研究人员对CRISPR-Cas13a系统进行调整,使之在哺乳动物细胞中发挥作用。相关研究结果于2017年10月4日在线发表在Nature期刊上,论文标题为“RNA targeting with CRISPR–Cas13”。 在这项新的研究中,来自MIT的张锋...
具体来说，张锋团队制作了一个双质粒RNA靶向CRISPR系统（two-plasmid RNA-targeting CRISPR system）。一个质粒表达导向RNA（guide RNA），另一个表达Cas13a基因。研究结果显示，CRISPR-Cas13a有效地编辑了转录自一个报告质粒以及人类细胞中3个内源性基因的RNA。此外，该研究中，张锋团队还找到了一种所谓的Cas13“死亡...
[2] Kordyś M, Sen R, Warkocki Z. Applications of the versatile CRISPR-Cas13 RNA targeting system. Wiley Interdiscip Rev RNA. 2022 May;13(3):e1694. [2] Kellner MJ, Koob JG, Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Zhang F. SHERLOCK: nucleic acid detection with CRISPR nucleases. Nat Protoc...
由此CRISPR-Cas系统被分为两大类,Cas13a是RNA靶向CRISPR酶,为第二大类VI型系统中的效应蛋白,具有RNA介导的RNA酶切活性,是目前第二大类CRISPR-Cas系统发现的唯一能够降解RNA的蛋白(Cas9, Cpf1, C2c1均是RNA介导的DNA核酸内切酶),它与DNA靶向CRISPR酶(如Cas9和Cpf1)不同是前者在切割其靶向RNA后可保持活性,而且...