摘要: 采用异硫氰酸胍和Catrimox-14TM联合变性,酚,氯仿和异戊醇抽提的方法,对真菌总RNA进行提取.得到的RNA样品经过紫外分光光度法和甲醛变性凝胶电泳检测,证实为完整,均一的总RNA,为构建真菌的cDNA文库和筛选差异表达的基因奠定了基础.关键词:真菌 RNA提取 异硫氰酸胍 Catrimox-14TM ...
1、從基因文庫或cDNA文庫中分離目の基因或通過pcr擴增得到目の基因;2、體外構建重組DNA分子,選擇合適の克隆載體如PBV220,用限制型內切酶分別加工外源基因與載體DNA,再用T4DNA連接酶連接外源基因與載體DNA,構建出重組質粒DNA分子;3、重組質粒DNA導入宿主細胞:制備感受態大腸杆菌宿主細胞DH5α,將重組題分子導入宿主細胞,...
透過µMACS Oligo(dT) MicroBeads分離並純化mRNA,同時也能進行cDNA合成,是屬於手動分選與low-throughput的技術,可搭配MultiMACS system達到全自動mRNA分離與high-throughput的目的。使用MACS® Technology 進行mRNA分離和cDNA合成的原理和時間 將細胞或組織裂解 放入專用的 Lysate clear column 將不需物的物質清除 ...
各cDNA サンプル 1:10 0.1 x TE バッファーで希釈します。 各サンプルの井戸/複製の数を計算します。各サンプルは、過剰量の 10% を追加する次のボリュームを遠心管に反応混合物を準備します。 RNase フリー水の 4 μ L、2 x 高速高度なマスター ミックス (材料表)の 10 μ L およ...
cDNA 外顯子 內含子 剪接體參考↑ Sorek R, Shamir R, Ast G. How prevalent is functional alternative splicing in the human genome?. Trends Genet. 2004, 20 (2): 68-71. PMID 14746986. ↑ Tseng CK, Cheng SC. Both Catalytic Steps of Nuclear Pre-mRNA Splicing Are Reversible. Science. 2008...
... cDNA合成 - プライマー伸長によるRNA解析 - DNAラベリング DESCRIPTION: アトラスHマイナスM-MLV逆転写酵素は、RNAまたはDNA依存性のDNAポリメラーゼを示すが、リボヌクレアーゼH活性を欠く遺伝子組み換えのM-MLV RTである。この酵素は、RNAまたはDNAをテンプレートとして、プライマー...
プローブ合成の手順については、我々は通常、 ショウジョウバエ遺伝子コレクション(DGC)は、次のWebサイトで詳細なリソースで見つかったプラスミドから増幅された完全長cDNAからショウジョウバエのin vitro転写によりランオフアンチセンスRNAプローブを生成: のhttp://www .fruitfly.org ...
この方法で調製できる高純度で分解していない RNA は,cDNA 合成, ラベル化,RT-PCR,定量 RT-PCR,マイクロアレイによる遺伝子発現 実験,ノーザンブロッティング,RNase プロテクションアッセイ等の アプリケーションに最適です. Agilent Technologies 5 1 はじめに 表 1 全細胞 RNA の標準...
1、從基因文庫或cDNA文庫中分離目の基因或通過pcr擴增得到目の基因;2、體外構建重組DNA分子,選擇合適の克隆載體如PBV220,用限制型內切酶分別加工外源基因與載體DNA,再用T4DNA連接酶連接外源基因與載體DNA,構建出重組質粒DNA分子;3、重組質粒DNA導入宿主細胞:制備感受態大腸杆菌宿主細胞DH5α,將重組題分子導入宿主細胞,...
使用intron-spanning primers與qPCR分析每組cDNA (cDNA取1/10分析) (A)使用μMACS One-step cDNA Kit (a: 500細胞; b: 5細胞)或傳統tube法 (c: 500細胞; d: 5細胞)分離mRNA並反轉錄成cDNA 。 e:non-template對照。 μMACS One-step cDNA Kit (Lanes 1 和 2:500 Jurkat細胞; Lanes 3 和 4:5 ...