经过纯化后，我们可以捕获到与目标蛋白互作的RNA分子，并通过定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）等方法对这些RNA进行鉴定。此外，RIP实验已经发展出多种方法，主要包括自然沉淀法和交联RNA免疫沉淀两大类。自然沉淀法虽然能够模拟细胞内的自然环境，让RNA和蛋白在接近生理状态的条件下生成复合物，从而在一定程度上保留了...
RIP的实验原理和CHIP类似，是利用某一蛋白的抗体，将目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，经过分离纯化就可以捕获和目标蛋白互作的RNA分子，再对捕获的RNA进行定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方法来进行鉴定。RIP实验当前已经衍生出很多方法，可以主要分为两大类，自然沉淀法（Native methods）和交联RNA...
该研究采用了吉赛生物的RIP试剂盒，通过anti-FUBP1或anti-IgG抗体对MCF-7细胞裂解液进行RIP检测，随后运用RT-PCR和qRT-PCR技术对circACTN4的富集程度进行深入分析。在生物实验的领域里，成功的秘诀往往在于充分的准备、严谨的操作以及良好的心态。与钓鱼的道理相似，RIP实验的成功也是可以通过遵循一系列的步骤和细节来...
RIP的实验原理和CHIP类似,是利用某一蛋白的抗体,将目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化就可以捕获和目标蛋白互作的RNA分子,再对捕获的RNA进行定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来进行鉴定。 RIP实验当前已经衍生出很多方法,可以主要分为两大类,自然沉淀法(Native methods)和交联RNA免疫沉淀...
RIP的实验原理和CHIP类似,是利用某一蛋白的抗体,将目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化就可以捕获和目标蛋白互作的RNA分子,再对捕获的RNA进行定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来进行鉴定。 RIP实验当前已经衍生出很多方法,可以主要分为两大类,自然沉淀法(Native methods)和交联RNA免疫沉淀...
⑦ RNA提取: 从免疫复合物中提取RNA,使其可以进行后续的分析,如逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、RNA测序或微阵列分析。 RNA pull-down RNA pull-down的主要目的是通过特定的RNA分子(通常是已知的非编码RNA或mRNA的片段)来富集与之相互作用的蛋白质,以便进一步研究这些相互作用的性质和功能。RNA pull-down的基本步骤...
4.将PCR反应管置于热循环器中。5.启动以下RT反应程序：37℃,1 h; 95℃, 5 min, 4℃保存。6.取下PCR管。用180 μL无核酸酶水（稀释10倍）稀释产物。产物可以存储在-20°C。六、 qPCR检测 在qPCR管中配制如下混合液 2.按下列条件进行qPCR反应 七、实验结果 7.1抗体在细胞样本中表达验证 （质控1）例如...
4、结合的 RNA 序列通过 microarray(RIP-Chip),定量 RT-PCR 或高通量测序(RIP-Seq) 方法来鉴定。 RIP实验基本步骤 一、细胞裂解液获取 A.单层细胞或者贴壁细胞处理 1、冷 PBS 清洗培养皿或培养瓶中的细胞两次; 2、加入冷 PBS 后用细胞刮将细胞刮下来,收集至 enpendoff 管; ...
RIP的实验原理和CHIP类似,是利用某一蛋白的抗体,将目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化就可以捕获和目标蛋白互作的RNA分子,再对捕获的RNA进行定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来进行鉴定。 RIP实验当前已经衍生出很多方法,可以主要分为两大类,自然沉淀法(Native methods)和交联RNA免疫沉淀...
理论上,可以采用能分别抽提核浆蛋白的蛋白抽提kit先分离样本,再进行RIP实验。但需要特别注意的是所用kit中的reagent不能有RNase和DNase,以及要能与下游的抗体beads孵育兼容。 7:因为RIP做完得到的是RNA序列,要做后续检测,比如测序、判断目标序列位置等,是不是都必须要做RT-PCR,...